大鼠脑组织中谷酸表达及其代谢的变化与癫痫相关性研究.pdf

中文 摘 要 大鼠脑组织中谷氨酸表达及其代谢的变化 与癫痈相关性研究 摘 要 癫痈是一种严重危害人民健康的常见病、多发病，其主 要临床特点之一是慢性反复发作，发作间期基本正常。一般 认为癫痈的发生是由于兴奋与抑制的不平衡，即兴奋性递质 的作用增强，抑制性递质的作用减弱。谷氨酸(Glutamate,Glu) 是中枢神经系统最重要的兴奋性神经递质，在兴奋的扩散和 传导中起决定性作用口星形胶质细胞((Astrocyte,AST)可以对 细胞外Glu摄取、代谢和释放进行调节，是Glu代谢的关键 部位。星形胶质细胞增生和胶质化是癫痈病人最重要的病理 特征之一。己有研究发现，在癫痈患者手术切除病灶中，胶 质细胞大量增生，并呈Glu免疫反应(Glutamateimmuno- reactivity,Glu-IR)阳性，提示胶质细胞可能通过影响Glu，使 神经元兴奋性提高，从而导致癫痛的复发。因此对Glu-IR 阳性细胞的研究不能仅重视Glu-IR阳性神经元，同时应关 注Glu-IR阳性胶质细胞的改变。那么癫痈状态下，针对AST 中Glu的代谢会产生什么影响，相关研究甚少。本课题正是 由此出发，研究癫痈时Glu-IR阳性细胞的变化及AST中 Glu代谢的相关改变，进一步探讨癫痈的发病机制。 目的 I观察致痈不同阶段大鼠脑中Glu-IR阳性细胞的变 化: 中 文 摘 要 2研究致病大鼠脑中AST中Glu含量的变化; 3研究致痈时大鼠脑组织中谷氨酸脱氢酶活性的改变。 方法:本实验共分三部分 1第一部分 急性惊厥和慢性癫痈大鼠动物模型的制 备口选用健康雄性Sprague-Dawley大鼠85只，鼠龄3-4个 月，体重240-260g。急性惊厥模型的制备采用单次腹腔注 射60mg/kg戊四氮(Penytlenetetrozal,PTZ)诱导的方法;慢性 癫痈模型采用 PTZ点燃法，隔日腹腔注射闺下剂量 35mg/kgPTZ，同时观察大鼠行为学改变及成模后脑电图较 对照组的变化，并进行。-fos免疫组织化学染色示踪痈性发 作过程。从行为学、脑电图和c-fos蛋白表达三方面验证动 物模型是否复制成功，为进一步的实验研究奠定基础。 2第二部分 激光共聚焦观察癫痈大鼠大脑皮层和海马 中神经元和星形胶质细胞谷氨酸的表达。健康雄性SD大鼠 26只，随机分为生理盐水对照组((n=6)、急行惊厥发作。 组(n=5)和慢性点燃Oh组(n=5),7d组(n=5),60d组(n=5). 4%多聚甲醛灌注后取前脑(主要是大脑皮层和背侧海马)，行 冰冻切片，进行Glu免疫组化染色与Glu和胶质原纤维酸性 蛋白(glialfibrilleryacidicprotein,GFAP)免疫荧光染色，激 光扫描共聚焦显微镜观察，图像采集，统计学分析。 3第三部分癫痈大鼠大脑皮层和海马中谷氨酸脱氢酶 活性测定。健康雄性SD大鼠41只，随机分为生理盐水对 照组(n=6)和急性惊厥模型组((n=20)、慢性癫痈模型组 (n=15)。其中急性惊厥模型组又分为惊厥发作后Oh,4h,24h 和7d四个时程组;慢性癫痈模型组又分为点燃成功后Oh, 7d和60d三个时程组，每组均为5只。取新鲜脑组织，应 一 -- ，，，~~~~ 2 中文 摘 要 用双试剂两步DGKC速率法检测大鼠大脑皮层和海马中谷 氨酸脱氢酶(GlutamateDehydrogenase,GLDH)的活性，统计 学处理。 结果 1第一部分 ((1)行为学观察:急性惊厥组大鼠一次致 痈后出现IV--V级大发作，可持续达lh;慢性癫病大鼠均达 到点燃标准，成模后每次注射PTZ均可诱发IV级以上发作; 生理盐水对照组无癫痛发作。(2)脑电图观察:生理盐水对 照组大鼠脑电图为正常a节律;癫痈大发作时呈高幅棘波、 尖慢及多棘一多尖综合波;慢性点燃大鼠发作间期脑电图己 有明显改变，呈弥漫性棘波放电。(3)c-fos免疫组织化学结 果:FOS蛋白表达有明显的分布和时间