以减毒沙门菌为体的口服dna疫苗的研究.pdf

上海第二医科大学硕士论文 中文摘要 以减毒沙门菌为载体的口服DNA疫苗的研究 DNA疫苗是近年发展起来的一项新型疫苗技术，通过接种含有目的基因的 真核表达质粒诱导机体产生特异性抗原免疫应答，不仅能产生体液免疫，还能产生 持久的细胞免疫应答。近年来对DNA疫苗免疫机制的研究报道表明发挥抗原递 呈作用的细胞主要是APC(抗原递呈细胞)，而非肌细胞。因为在非炎症状态下， 肌肉中APC很少，绝大部分质粒DNA转染的是非APC细胞(如肌细胞、皮肤 角朊细胞)，只有很少一部分转染APC，抗原递呈效率较低。如果将DNA直接 传递入APC中，同时合并炎症刺激，那免疫应答将强烈得多。近年来报道的用 减毒沙门菌、志贺菌、李斯特菌为载体的DNA疫苗即可达到这种目的。本实验 B(启动 选用芳香氨基酸合成缺陷的减毒沙门菌SL7207为真核表达质粒pCMV 子为e蝌立即早期启动子，真核表达昼半乳糖苷酶)的载体，体外研究了其能否 有效地将质粒DNA转运到吞噬细胞核中进行表达。体内通过口服免疫小鼠，研究 Ⅵ 了是否能引起特异性细胞免疫和体液免疫。庠实验分为2部分，主要内容和结果 如下： ＼ 1．体外检测减毒沙门菌为载体的真核表达质粒在小鼠腹腔巨噬细胞中的表达 用CaClz方法将pCMV B的 13质粒转化入SL7207中，用携带质粒pCMV SL7207体外感染小鼠腹腔巨噬细胞，然后用庆大霉素杀死胞外细菌和用四环素 抑制胞内细菌生长，培养48小时后，用X-gal染色方法和RT—PCR方法检测到巨 噬细胞内有§一gal的表达。说明减毒沙门菌能在体外有效将质粒DNA转运到巨 噬细胞核中进行真核表达。 2．减毒沙门菌为载体的DNA疫苗口服免疫诱导小鼠免疫应答的研究 结和Peyer’s 上海第二医科大学硕士论文 生特异性抗体、特异性淋巴细胞增殖反应和CTL反应。与直接肌肉注射DNA疫苗 pCMVB相比较，SL7207(pCMVB)能更有效地激发细胞免疫应答 卜 关键词：减毒沙门菌DNA疫苗口服免疫体液免疫细胞免疫 2 上海第二医科大学硕士论文 英文摘要 oralDNA onthe vaccination Experimentalstudy byusing attenuated asvector salmonella．typhimurium Geneticimmunizationhas a new recentlyprovided promisingapproach to vaccination．NakedDNA—based steredintramuscular vaccines，admini by can inducenot hume