嗜水气单胞菌主外膜蛋白免疫原性分析及其基因克隆与表达.pdfVIP

摘要 本研究选取鳗源嗜水气单胞菌L316和参考菌株嗜水气单胞菌TPS．30，分别制各了 08cfu MOMP．]SCOMs，免疫40天后，用3×1 分别免疫欧洲鳗鲡，每尾腹腔注射20ug 和3×10 7cfu两个剂量的TPs-30分别腹腔注射攻毒，实验结果表明，免疫鱼能抵抗3× 107cfu剂量TPS一30菌的攻击，TPS-30 MOMP—ISCOMs免疫鱼的相对免疫保护力为80％． 而L316 鱼血清中含有针对嗜水气单胞菌外膜蛋白抗体，实验结果初步证实嗜水气单胞菌主要外 膜蛋白免疫刺激复合物能够诱导宿主产生特异性的免疫保护作用。 根据已发表嗜水气单胞菌的外膜蛋白基因Omp的核苷酸序列设计引物，利用PCR技 5．0、ClustMW等分子生物学软件分析，显示主要外膜蛋白前24个氨基酸是较 Antheprot 强的疏水性区域，可组成信号肽，其与Omp基因的同源率达96％，氨基酸的同源率高达 SDS—PAGE电泳分析显示诱导表达的基因产物分子量 IPTG诱导后，可得到高效表达。 步证实，表达产物能被嗜水气单胞菌L316主要外膜蛋白特异性抗血清所识别，产生明显 的染色条带，说明所表达的基因产物与天然的外膜蛋白抗原性一致。 鳗源嗜水气单胞菌L316主要外膜蛋白免疫刺激复合物的制备与应用研究，对研制鱼 类疫苗学问题进行了新的初步探索：成功地克隆和表达嗜水气单胞菌L316主要外膜蛋白 基因为在单因子水平上研究嗜水气单胞菌外膜蛋白的作用和免疫功能以及制备嗜水气单 胞菌基因工程疫苗和亚单位疫苗奠定技术基础。 关键词：嗜水气单胞菌；外膜蛋白：免疫刺激复合物； 外膜蛋白基因；表达载体 免疫印迹：亚单位疫苗 ABSTRACT Inthis of outer paper,the membrane cloningmajor of protein Ae，口，”o盯ds gene andthe hydrophila ofthe were immunogenicity discussed．The geneproduction maiorouter membrane an Aeron?onas named proteins(MOMPs)of AhL3 hydrophila 16whichisolated from diseasedeeland thereferential strainAhTPS一30 were and for used purified preparing Immunostimulating