培养胚胎、小儿肤成纤维细胞的比较及tgf-β1对小儿成纤维细胞的干预研究.pdf

目 录 1 培养胚胎、小儿皮肤成纤维细胞的比较及 TGF-β1 对小儿成 纤维细胞的干预研究…………………………………………1 1.1 中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 1.2 英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3 1.3 前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5 1.4.1 第一部分材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„8 1.4.2 结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„15 1.4.3 讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„22 1.4.4 结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„24 1.4.5 第二部分材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„25 1.4.6 结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„29 1.4.7 讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„37 1.4.8 结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„40 1.5 参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4 1 1.6 英汉缩略词对照表„„„„„„„„„„„„„„„„„46 2 致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„47 3 无瘢痕愈合的信号转导机制研究进展（综述） „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„48 胚胎、小儿皮肤成纤维细胞及TGF-β1 干预后小儿皮肤成纤维细 胞调节的 Ⅰ、Ⅲ型胶原降解 摘 要 目的：研究培养人胚胎、小儿皮肤成纤维细胞及 TGF-β1 干预后小儿皮肤 成纤维细胞的盘状结构域受体1 （DDR-1；discoidin domain receptor ）、基 质金属蛋白酶13 （MMP-13；matrix Metalloproteinases ）、增殖细胞核抗原 （PCNA ；Proliferating cell nuclear antigen ）、Ⅰ型胶原（collagen Ⅰ；Col- Ⅰ） 及Ⅲ型胶原(collagen Ⅲ；Col-Ⅲ) 的表达及相互关系，从而探讨 Ⅰ、Ⅲ型胶 原的降解途径并观察培养胚胎与小儿成纤维细胞的形态特征。方法：1.原 代培养小儿包皮成纤维细胞(human postnatal dermal fibroblast ；hPDF)和人 胚胎皮肤成纤维细胞 （human fetal dermal fibroblast ；hFDF ）并传代；2.应 用HE 染色法观察hFDF 与hPDF 的形态结构特点；3.应用免疫组织化学S-P 法检测hFDF 与hPDF 的DDR-1、MMP-13、PCNA （Proliferating cell nuclear antigen ）、Ⅰ型胶原（collagen Ⅰ；Col- Ⅰ）及Ⅲ型胶原(collagen Ⅲ；Col-Ⅲ) 的表达；4.利用外源性转化生长因子β1 （TGF-β1 ）（5ng/ml ）干预hPDF, 并 设立TGF-β1 未干预的对照组，分别于TGF-β1 孵育8 小时、24 小时、48 小时、96 小时收获细胞；5.应用免疫组织化学S-P 法观察不同时间点TGF-β1 干预组与对照组hPDF 的PCNA 和DDR-1、MMP-13、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶 原的表达；6.应用IX-71 显微成像系统（OLYMPUS ）在低倍（×100 ）视野 下观察分析及照相，用Image-pro6.0 图像分析系统测定各项指标的平均光 密度值；7.所得数据以均数±标准差（ ±s ）表示。采用spss19.0 统计软件  进行统计学分析，应用两独立样本t 检验、秩和检验、重复测量方差分析、 单因素方差分析、LSD 检验、Pearson 相关分析及多重线性回归分析法，P 1 ＜0.05 为具有统计学意义。结果：1.hFDF 组DDR-1、MMP-13、Ⅰ、Ⅲ型 胶原的平均光密度值皆高于hPDF 组(P0.05)，hFDF