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应用碱基淬灭探针法检测　-1 抗胰蛋白酶基因 342Glu→Lys 突变 中文摘要 应用碱基淬灭探针法检测α-1 抗胰蛋白酶基因 342Glu→Lys 突变 中文摘要 目的：利用碱基淬灭探针技术建立检测编码α-1 抗胰蛋白酶基因 342Glu→Lys 突 变位点的新型诊断方法。 方法：（1）方法学构建：引物、探针设计，探针 3 端标记 6-羧基荧光素，同时 构建 2 个载体作为阳性对照模板，分别代表两种可能的纯合子基因型，即野生型 （342Glu/Glu ）和纯合突变型（342Lys/Lys ）。收集338 例病人全血标本，离心柱法抽 提基因组 DNA ，PCR 扩增目的产物，应用熔解曲线对结果进行分析判断。（2 ）方法 学优化：优化 PCR 反应条件并检测方法的准确性和灵敏性。 结果：熔解曲线分析结果显示纯合突变型（342Lys/Lys ）和野生型（342Glu/Glu ） 分别在 41.38±0.90°C 及 48.64±1.33°C 处出现单一熔解谷；人工构建的杂合子（342Glu/ Lys ）在 41.38±0.90°C 及 48.64±1.33°C 处均出现熔解谷。338 例病人标本均在 48.64±1.33°C 处出现熔解谷，与野生型阳性对照结果一致，即所有标本基因型均为 3 342Glu/Glu 。灵敏性分析结果显示模板 DNA 量在 10 拷贝时也可以看到明显的熔解 谷。Kappa 检验显示该方法的检测结果与 DNA 测序法所得结果完全一致（K=1 ， P=0.000 ）。 结论：本研究所建立的方法准确、简单、经济，适合大规模对α-1 抗胰蛋白酶基 因 342Glu→Lys 突变的分型诊断。 关键词：单核苷酸多态性； α-1 抗胰蛋白酶缺陷病； PiZ 型突变 作 者：秦 莉 指导老师：罗光华 I Abstract Detecting alpha-1 antitrypsin gene mutation of 342Glu→Lys using a base-quenched probe Detecting alpha-1 antitrypsin gene mutation of 342Glu→Lys using a base-quenched probe Abstract Objective: We developed a new method of the base-quenched probe technique to detect a mutation of the alpha1-antitrypsin gene, consisting of the substitution of lysine for glutamate at 342(Glu342Lys). Methods: (1). Methodology: according to the principles of probe design, 6-carboxyfluorescent was directly conjugated to the 3end of the probe. Two vectors, representing the two genotypes, wild type (342Glu/Glu) and