异种hspl;,70gt;及异种hsplt;,70-gt;肿瘤抗原复合物对γδt细胞的活化作用.pdfVIP

异种HsP，。及异种HsP，。．肿瘤抗原复合物 对v6T细胞的活化作用 硕士研究生：高诗娟 指导教师：施广霞 教授 专业名称：病理学与病理生理学 complex，MHc) Y6T细胞是一种主要组织相容性复合体(Majorhistocompatibility 非限制性杀瘤细胞，在肿瘤继承性细胞免疫治疗中有应用前景。 shock 热休克蛋白(Heat pmteins，HSP)是一种进化上高度保守的蛋白质，是Y6T 细胞的超抗原，不仅能提高细胞对有害刺激的抵抗能力，而且在免疫应答的诱导 调节过程中也发挥重要作用。 从肿瘤组织中提取的HsP．肽复合物具有免疫原性，可以产生针对该肿瘤的特 T 异性免疫，诱导杀伤性T淋巴细胞(Cytotoxicl蛐phoc”es，cTL)免疫应答，特异 杀伤肿瘤细胞。临床实验表明，将从肿瘤患者手术切除的肿瘤组织中提取的HSP一 肽复合物回输给患者本人，其残余肿瘤的大小及肿瘤复发时间均得到控制，且存 活时间得到延长”1。但患者体内肿瘤组织中HSP．肿瘤肽复合物的量比较少，难以 达到有效量。 本实验用异种HsP，。及异种HsP，0．肿瘤抗原复合物体外扩增人外周血单个核 bloodmononuclear 细胞(Peripheral cells，PBMCs)，以期寻找一种新的有效的扩增 Y6T细胞的方法，并检测了所扩增的Y6T细胞的亚型及细胞毒活性；用ADP化学 连接法体外构建了HSP，。。一Daudi肿瘤肽复合物并检测其活化的Y6T细胞的增殖、 细胞毒活性及分泌的细胞因子的水平，主要结果如下： 一：异种HsP，。对俩T细胞的活化扩增作用： 以抗TC脚6抗体为阳性对照，分别用HSP，。Bc。及从榄香烯处理的小鼠Hca—F肝 癌细胞复合瘤苗中提取的HSP，。．肽复合物来刺激人PBMCs的Y6T细胞，以期建立 一种新的扩增体系，并探索异种HSP，。对人Y6T细胞的活化作用。 1、细胞的扩增及Y6T细胞受体表达： 细胞培养14天后，固相抗体法可使培养的细胞总数增加30．40倍，Y6T细胞 的平均纯度为71．23％±2．7％：HSPⅣ肽复合物可使培养的细胞总数增加5-6倍，俩T细 胞的平均纯度为27．26％±4．24％；1640对照组培养体系，7天左右细胞开始出现 死亡，14天时以死细胞居多，活细胞总数未见增长，筇T细胞的平均纯度为7％±2％。 Y6T细胞平均纯度各组问均存在显著性差异(p‘O．05)，即扩增效率依次为：抗体 得到表达。 2、异种HsP。扩增的徊T细胞对Daudi的杀伤作用： 细胞毒实验结果表明：在效靶比为10：l时，各培养体系所扩增的75T细胞对 在效靶比为5：1时，杀伤活性依次为：抗体组85．2％±5_79％HSP，。。。G组 两组之间无显著性差异(PO．05)；在效靶比为2．5：1及l：1时，仅抗体组强于其 05)。 他组(P0 二、HsP7。。。Daudi肿瘤肽对Y6T细胞的活化作用： 杀伤活性，并于刺激的24小时取上清，测n咂一a生物学活性，结果如下： 1、杀伤实验：在效靶比为10：l时，杀伤活性依次为：HSP，oBcG—Daudi肿瘤肽 对照组39．43％±7．74％(后三者间无差别，PO．05)。 2、增殖实验：24小时及48小时的增殖结果各组间无差别。而未静息化处理 的v盯细胞的24小时及48小时的增殖均大于上述各组(P0，05)。 3、细胞因子：未检测出上述各刺激组的上清中n婚．a生物学活性有何差别。 实验结果表明异种HSP70对人外周血单个核细胞中的丫6T细胞具有活化作用， 与IL一2合用可以扩增Y6T细胞。HSP。。。。对Y6T细胞的活化扩增作用强于小鼠的 V63三种受体亚型都得到表达，受体库完整，扩增的Y6T细胞对Daudi淋巴瘤细胞 有较强的杀伤作用。用ADP构建的HsP，。。。。一Daudi肿瘤肽复合物能提高静息化处 提供了实验依据。 关键词：T6T细胞HsP。。B。。HsP，。．肽复合