新基因arg1染砷后293t细胞增殖凋亡以及mapk信号通路的影响.pdfVIP

摘 要 目的 观察ARG1 基因对293T细胞的增殖、凋亡以及p-JNK、p-ERK表达量的影响，并探讨ARG1 的抗 砷作用。 方法 （1）重组质粒pcDNA-ARG1及空质粒抽提后采用PCR 的方法进行质粒鉴定，最后进行质粒DNA测 序； （2 ）将ARG1 表达质粒pcDNA3.1-IE-ARG1 及空载体对照质粒pcDNA3.1-IE分别经阳离子脂质体 （Lipofectamine2000)介导转染入293T细胞后，采用荧光共聚焦显微镜观察细胞转染效果； （3 ）提 取细胞总RNA后进行逆转录，然后使用Real-Time PCR 的方法检测转染后293T细胞的ARG1 表达量； （4 ）将实验组pcDNA3.1-IE-ARG1 -293T细胞、空白对照组pcDNA3.1-IE-293T细胞及阴性对照组293T 细胞分别与0、1、2 、4 、8、16、32 µmol/L浓度的NaAsO 孵育48 h后，使用MTT法检测ARG1 基因对 2 砷染毒后293T细胞增殖的影响； （5 ）根据MTT结果将实验组、空白对照组及阴性对照组细胞分别 与0、1、4 、8 µmol/L浓度