日本血吸虫童虫dna文库免疫学筛选及其基因克隆、表达和鉴定.pdf

日本血吸虫童虫eDNA文库免疫学筛选及其基因克 隆、表达和鉴定 交丛莲盘盘鲎塑圭生焦逾塞—一 F茂红 导师 沈际佳教授 安徽医科大学病原生物学教研室 合肥 230032 ^，}‘ 中文摘要 ! ； 。，， 黝i利用免疫学方法筛选R本血吸虫奄虫cDNA文库，以寻找新的编码血吸虫 瘸诊断和候选疫苗分子基因。【方法：收集感染血吸虫患者混合血清．并对血清经 | 滤膜吸附法以去除大肠杆菌抗体，以筛选日本血吸虫肝期馥虫cDNA文库。从3次 复筛得到的阳性克隆中选取3个进行插入片段的核苷酸序列测定，结果送GeneBank 进行同源性分析。根据序列测定结果，选取其中一个具有完整丌放阅读框架的基 因，设计合成引物，PCR体外进行扩增，并将其克隆入pGEⅥ一T载体，然后在表达 blotting进行鉴定。结果：用抗血清初筛了约7．2×10’个重组的噬菌体，得到48 个阳性克隆，对其中的18个克隆进行三次复筛．得到12个持续阳性反应克隆。 选取其中三个克隆进行测序并经同源性分斫，结果其中编号为¨4克隆的插入序列 为编码同本血I吸虫的14—3—3基因：编号为H9克隆的插入序列为编码闩本血吸虫 的线粒体基因；编号为Hl克隆的插入序列长度为l186bp，与现有的基因无任何嗣 源性，且具有一个591bp的完整丌放阅读框，利用PCR法扩增该基因，克隆入载 体pGEM—T，再亚克隆入表达载体PBK—CMV中，所形成的质粒经双酶切和以质粒为 SDS—PAGE，发现在约26．5KDa位置出现一条表达条带，且随着表达时问的推移， 表达产物量增大。Western blotting鉴定结果表明阳性病人的血清可特异性地tH X—矗”一一 别此条带。结论：j从闩本血吸虫奄虫cDNA文库中免疫筛选N-批编码对血吸虫 ／ 的感染可能具有保护作用的分子，通过序列测定、克隆、诱导表达和签定，为进 一步利用分子生物学方法研制其防治的疫苗和诊断抗原奠定基础。 关键词：同本血吸虫cDNA文库免疫学筛选基因克隆鉴定 __———-————一、‘一、～。_—p一～～ 、In…一 ‘一 1 童丝匿盘盘茎塑±鲎焦迨塞 eDNA ofSchistosomulum Library Immunoscreening japonicum and oftheGenes 一—一 Bian Graduate： maohong jijia Supervisor：Prof．Shen A1bstract to eDNA wasimmunoscreeneddiscover Library japonicum Objective：Sch