猪乙型脑炎新型同凝集试验的建立.pdf

摘要 流行性乙型脑炎是—种人畜共患自然疫源性的急性传染疾病，该病严重威胁养猪业的快速、 联表达，建立了新型协同凝集试验．研究结果如下： 1．根据已发表的JEV 设计两对特异性引物，通过PCR扩增出一条长0．473bp的基因片段和一条长0．469bp的基因片段． 2．为验证JEV E’基因在E．coli中表达的可行性及表达产物的抗原性，构建了原核表达载体 pETE’，对表达产物进行Westemblotting分析，结果与JEV特异性猪抗血清呈现阳性反应，且无 非特异性条带出现，证明表达产物抗原性较好． 3．构建了原核表达载体pETE’-CH3，诱导表达，超声破碎菌体，对包涵体纯化，进行 ’ SDS，结果在43kD处出现一条清晰的特异性蛋白条带，杂蛋白很少，纯化良好． 4．确定最佳吸附浓度为1．892；血清和金黄色葡萄球菌的比例为：1：4；最佳吸附时间确定为 一个半小时，用LB培养的金黄色葡萄球菌的吸附效果最好． 5．确定制作稳定液SPA和蛋白的最佳比例为1．276：0．945．新型协同凝集试验96孔进行时 血清稀释到1：640依然可以区分阴阳性。