猪弓形虫病环介等温扩增检测技术的建立与评价.pdf

中文摘要 弓形虫病(Toxoplasmosis)是一种严重的人兽共患寄生虫病，其常用的诊断方法包括病原学、 免疫学和分子生物学诊断方法。但这些方法在特异性、简便程度、温度和试剂仪器要求等方面各 有缺点。因此，建立一种既敏感、特异，又简便实用的弓形虫病诊断方法是迫切需要的。环介导 isothermal 等温扩增(100p-mediated 合酶完成靶序列的扩增，仅需恒温加热就能扩增DNA，可以通过观察利用核酸染料染色观察而 直接判定结果，具有简便、快速的特点． 本研究利用多拷贝的弓形虫AFl46527基因为靶序列设计引物并建立了LAMP检测方法，以 1．5％琼脂糖凝胶电泳观察扩增产物的方法对反应体系(包括镁离子、甜菜碱浓度)及反应条件 mmol／L LAMP检测敏感性并与常规PCR检测方法进行敏感性比较．结果表明，当采用6 M92+、 采用PicoGreen染色观察也得到相同的结果，而且同球虫、隐孢子虫及猪组织DNA没有