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天然产物化学刘湘版第四章糖苷和多糖改精要.ppt
* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * ●单糖的鉴定 为了鉴定低聚糖、苷类乃至多糖分子中的单糖种类及其比例,通常是将其苷键全部水解(乙酰解),然后经TLC、PC、GC或HPLC检出。 一、研究糖链结构的一般程序 ●单糖间、糖与苷元间连接位置的确定 确定苷键的连接位置,目前主要是应用13C-NMR中的苷化位移法,其方法是: 将苷化合物或低聚糖先行甲醚化或乙酰化,测得其13C-NMR谱,然后将其水解,再测其水解产物的13C-NMR谱,归属比较其变化,以推断苷键的连接位置。 如: 一、研究糖链结构的一般程序 水解前后 △δ: C2 29.7 32.0 -2.3 C3 77.0 70.9 +6.1 C4 34.3 38.4 -4.1 因成苷引起的化学位移变化,专业上称之为苷化位移(glycosidation shift)。 ●糖链连接顺序的确定 ▲经典方法:缓和水解;酶解;乙酰解等 这些方法都是将苷部分裂解成次级苷或低聚糖,再分析鉴定糖的碎片。 虽然经典方法至今尚有一定的实际应用价值,但日新月异的波谱技术已正在取代其角色。 一、研究糖链结构的一般程序 ▲ MS法测定糖链连接顺序 ◆技术→FDMS、FABMS等。 ◆优点→不必制备衍生物,用量小,准确,简便。 ▲NMR法测定糖链连接顺序 是将糖及其苷类衍生物全乙酰化后,测定观察两糖之间质子的远程偶合或NOE效应,以期确定糖的连接顺序。 ●苷键构型的确定: ▲经典方法:苷键构型的确定虽然经典的酶水解法、分子旋光法*(即Klyne法)仍时有应用,但目前多被NMR法所代替。 p55 一、研究糖链结构的一般程序 ▲ NMR法确定苷键构型:主要是利用成苷糖的端基质子在δ5.0左右,少被覆盖,依据其与C2上质子偶合裂分的不同进行判断的。如glucose: β α 可见β-甙键的Anomeric-H J多在6.0-8.0Hz,而α-则多在2.0-4.0Hz,非常易于区别,但对于诸如甘露糖和鼠李糖之类则因C2-H处在横键上,双面角相近,其J值差别不大,不足以区分α-和β-异构体,遇到此种情况,多采用13C-NMR的门控去偶技术测其端基碳与端基质子的偶合常数,即JC1-H1来区别。如: 吡喃糖苷C1-H是e键时(α-苷)1JC1-H1=170Hz C1-H是a键时(β-苷)1JC1-H1=160Hz ▲ NMR法确定苷键构型 第六节 糖和苷的提取与分离Extraction and Isolation of Saccharides and Glycosides 如同其他天然产物化学成分提取分离一样,糖和苷类的提取分离也必须首先全面分析所研究的天然产物中糖和苷类成分的性质及共存成分的情况,方能设计合理的方案,但要对类型繁多、结构复杂、性质差异明显的糖及其苷类提出共同的基本提取分离方案,实属难事。但以下问题则是提取分离糖及其苷类成分时必须考虑的共同点。 第六节 糖和苷的提取与分离 ●酶对糖及其苷类提取的影响 通常含糖及其苷类化合物的天然药材组织中往往同时含有酶,共存酶能促使苷键裂解,故药材粉碎后,受潮、冷水浸泡都能促使它们的相互接触致使苷键裂解,生成次生苷乃至苷元,影响原有成分及其作用,因此: ▲欲提取原始苷时,需杀酶,60%以上乙醇、甲醇或80℃以上水处理; ▲欲提取次生苷或苷元,需利用酶,如发酵等。 第六节 糖和苷的提取与分离 一、提取分离糖及苷时须考虑的问题 ▲糖苷类具多羟基,极性较大,易溶于水,难溶于低极性有机溶剂,但苷类化合物的溶解度则因苷元性质不同而有较大差异。 ▲一般说来,糖苷类成分大多在甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯中溶解度较大,提取效率较好,又能抑制酶,故为优选溶剂;然而,水也为常用溶剂,尤其是糖的提取,可选用热水提取,但杂质较多,同时应注意共存有机酸的影响,必要时可用缓冲液。 二、提取糖及苷类溶剂的选择 三、杂质的除去 由于糖及其苷类分子中多羟基的存在,难以结晶析出,若混有少量杂质,纯化结晶更难,故需采取多种方法方能达到分离目的。 ●分级沉淀法 是利用多
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