一株鼠抗人4-bbl功能性单克隆抗体的研制及生物学特性的研究.pdf

一栋鼠抗入套lBBL功缝性单克整撬体的研制及生物学特性鳇研究 孛文藏要 一株鼠抗人4—1BBL功能性单克隆抗体的研制及生物学特 性的研究 中文摘要 37L)是II型跨膜糖蛋白分予，TNF超家族成员，表达于各种活化的 4．1BBL(CDl 抗原提里细胞(舢℃)表面，如IFN-y活化的巨噬细胞、CD40配体活化的B细胞、 刺激信号可以诱导T细胞的活化，增殖及抗凋亡作用，同时还可维持T细胞的长期 化，并在初次免疫应答的后期，二次免疫应答及免疫记忆中发挥效应。4．1BBL还可 介导逆尚信号诱导单核细胞、瓣瘤细胞的增殖及促进其细胞因子的分泌。这种逆向信 号可能在肿瘤免疫应答中起至关重要的作用。4IlBBL分子的激动剂或拮抗剂的研制 及其在4．1BB|／4．1BBL信号传导调节作用的研究在肿瘤、移植排斥反应、自身免疫性 疾病中具有重要的理论研究意义和应用价值。 采用B淋巴细胞杂交瘤技术，将免疫后小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／o进行 细胞融合，以【舵9阵lBBL细胞株作为阳性细胞株，以转基因细胞的母本细胞L929 作为阴性对照细胞株，经免疫荧光标记分析及抗体分泌阳性孔内细胞的反复筛选并经 多次的亮隆化培养，最终获得l株持续、稳定分泌鼠抗人4．1懿BL单克隆抗体的杂交 癯细胞株，命名为3E7。经体外长期传代培养和液氮冻存后复苏，杂交瘤细胞生长良 好，分泌抗体的性能稳定。该抗体效价在l：l000以上，纯化后抗体蛋白用予间接免 一株鬣撬入拳18转毛臻麓性萃尧隆撬体熬研制发生物学特性的硗究 中文攘簧 2．为了研究单克隆抗体对4．1BBL分子表达细胞的识别和结合，选择表达4。lBBL 膜分子的人单核性自血病细胞株U937以及SHI．1、人早幼粒白血病细胞株l{L．60、 接免疫荧光标记法及流式细胞仪分析，结果显示，单抗3E7能特异性的地识别上述血 液系统恶性肿瘤细胞株上表达的4．1BBL分子。 3．经过细脆计数、光镜观察及流式细胞仪分析证实单抗3E7能介导逆向信号诱导 人单核细胞在体外有效扩增(3～4倍)，进一步用ELIsA检测细胞培养上清，结果显 ‘ 示，单抗3E7能有效地促进单核细胞分泌IL．6和1NF．a。 4．流式细胞仪检测结果显示，H】r，60细胞和Ur937细胞表匾表达4．IBBL膜蛋白； 细脆和Ur937细胞上的4．1BBL分子同样能够介导逆向信号，并且通过逆翔信号促进 这两种白血瘸细胞株的生长，促进其分泌IL．6，使之进入S期的细胞比例增加。 出现了共内吞，嘲此表明4．1BBL确实在功麓上与礼酣有一定的关系。 综上所述，本研究成功的地获得了l株稳定和特异分泌抗入冬王BBL的功能性单 壳隆摭体的杂交癯(3E7)，证实所分泌的抗人4．18BL单克隆抗体通过逆向信号显著 地诱导人外周血单核细胞的体外生长。单抗3E7可促进白血病肿瘤细胞株HL-60和 细胞株表面共定位，37℃条件下出现了共内吞。这株抗体为深入探讨肿瘤细胞表达 4。1BBL分予的生物学意义提供了物质基础，也为靶向治疗打下了物质基础。 关键词：4-l努BL；单克隆抗体；逆向信号；髓足4 硕士研究生：王旭东 指导教师：张学光教授 II 一株鼠抗人4-lBBL功能性单克隆抗体的研制及生物学特性的研究 英文摘要 of anti—human4—1BBLmoleculefunctional Preparation monoclonalmon0CIOnaIantibodiesantIbodIeSandandStudV0toftheirtheirbiOlogiCaI study biological characteristics Abstract