中国hiv-1行株对广谱中和抗体vrc01敏感性的分子机制研究.pdfVIP

Y2340433rllrrlnnIIIIl…Hil 目录 摘要………………………………………………………………………………………………………………。，…1 ABSTRACT………………………………………………………………………………………………………．3 前言…………………………………………………………………………………………………………………5f|U吾…………………………………………………………………………………………………………………… 研究路线………………………………………………………………………………………14 实验材料…………………………………………………………………………………15 实验方法…………………………………………………………………………………………17 实验结果………………………………………………………………………………。31 1毒株筛选结果………………………………………………………………………………．．31 2HIV-1突变株对VRC01的中和敏感性………………………………………………39 3 HIV-1突变株对VRC01的中和敏感性与结合能力的关系………………………．48 4HIV-1突变株对其它CD4结合位点相关的蛋白及抗体的中和敏感性………．56 5对VRC01耐受的毒株在感染者体内的变化规律………………………………70 讨论…………………………………………………………………………………………………………………．77 结ij仑…………………………………………………………………………………………………………………．81 参考文献…………………………………………………………………………………．．82 摘要 人类免疫缺陷病毒(Human Virus，HIV)膜区的糖蛋白具有 Immunodeficiency 高度的变异性，可以导致病毒逃逸人体内发生的抗原抗体反应，是人类研究有效的 艾滋病疫苗的主要障碍。在过去四年中，通过综合应用先进的技术策略，研究者们 分离发现了多个完全人源的具有高效中和能力的单克隆广谱中和抗体。根据广谱中 和抗体设计相应的疫苗成为HIV-1疫苗研究的热点方向。VRC01，是研究者采用高 通量特异性扩增单个B细胞抗体的技术于2010年发现的具有广谱中和活性的单克 于gpl20蛋白的loop 以上的国内外HIV-1流行株。但在研究中仍发现了少数的分离毒株对VRC01具有 不同程度的耐受，深入研究这些流行毒株对广谱中和抗体VRC01的耐受机制，并 阐明耐受株在体内免疫选择压力作用下对VRC01的中和敏感性的变化规律，能够 帮助人们更好地了解病毒与广谱中和抗体的相互作用机制，同时能够为抗体相关疫 苗的研制和应用提供重要的信息。 为了研究中国Hrv二1流行株与广谱中和抗体VRC01的相互作用特点并揭示流 行株中耐受毒株的耐受机制，本研究首先通过序列比对分析和假病毒的中和实验筛 CRF08 选到分离自同一份硼v-1 这两株病毒的膜蛋白序列高度相似，94％以上的氨基酸序列完全相同，在与VRC01 D区域仅有一个氨基酸的差异，CD4结合区则完全相 相互作用的主要区域中，loop 同，V5区域有4个氨基酸不同。但是这两株病毒对VRC01的中和敏感性相差24 D和／或V5区域进行了整体互换和单个氨基酸的突变，结果表明， 和CNE48的loop 包含有V5区域互换的突变株对VRC01的中和敏感性都发生了明显的变化。因此， 进行了进一步的验证，结果发现，在这些毒株中，V5区域同样是决定病毒对VRC01 的耐受。结构模拟分析结果表明，X--IIV--1 gpl20的460位的天门冬酰胺可以增加 耐受。假病毒的膜蛋白与VRC01的结合实验证明，病毒对VRC01的结合能力决定 了其对VRC01的中和敏感性。随后，我们研究了含有突变的病毒对其它的CD4结 D和V5区域的变化都没有 合位点相关蛋白和抗体的敏感性变化，结果表明：loop