中国龙虾基因组库的构建及微卫星标记的筛选.pdf

摘要 本文通过构建中国龙虾(Panulirus stimpsoni)的小片段基因组文库并运用PCR 法从中筛选含有中国龙虾微卫星序列的重组阳性克隆。筛选的引物为pUCll8载体 虾基因组文库中的重组阳性克隆进行筛选。对经过筛选后可能含有中国龙虾微卫星 序列的重组阳性克隆进行测序，首次得到了78个中国龙虾微卫星序列，分别分布 于55个中国龙虾重组阳性克隆中。对78个中国龙虾微卫星序列进行分类，其中 6个，占7．7％； 3个，占3．8％；compound perfect50个，占64％；imperfect perfect 19个，占24．5％。这些微卫星序列都已经在Genbank中进行了 compoundimperfect 序列的含量非常丰富。 从78个中国龙虾微卫星序列中选取了24个较好的微卫星序列，运用Primer5．0 进行引物设计并委托上海生物工程有限公司合成24对微卫星引物。经过设置梯度 退火温度进行PCR筛选，2％琼脂糖电泳和8％聚丙烯酰胺电泳检测PCR产物，24 对微卫星引物中有20对能够扩增出产物，再经过调节、优化PCR反应条件，应用 8％聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，最终筛选出具有多态性的中国龙虾微卫星引物17对， 其中合适进行中国龙虾微卫星分析的引物有15对。在20个中国龙虾样本中用具有 多态性的微卫星引物扩增其基因组DNA，在15个微卫星位点上，得到等位基因的 数目为3到12个不等，等位基因的大小分布在78bp到425bp之间，基本符合引物 设计的理论长度。这些微卫星位点的期望杂合度范围为0．48到0．87，平均值为0．71， 表明中国龙虾基因组微卫星具有较高的杂合度，中国龙虾具有较高的遗传多样性。 点在中国龙虾基因组中包含丰富的遗传信息，合适用于中国龙虾的各种分子标记及 遗传学分析和应用。 关键词：中国龙虾，基因组文库，PCR，微卫星筛选，微卫星标记 Constructionof andIsolationof library genomic markersfromChineseLobster microsatellite (Panulirus stimpsoni) Abstract andthemicrosatellitemarkerswere Asmallsize wasconstructed genomiclibrary isolatedinChineseLobster(Panulirus PCR primers using technique．The stimpsoni)by the wereM13+／．and(CT)15，(AT)15．Theprimers assembledtoisolatethemicrosatellitemarkersfromthe genomic firsttime． microsatellitesofPanulirus wereobtainedafter forthe stimpsoni