bmp-7诱导肪干细胞微团培养下成软骨能力的实验研究.pdfVIP

·中文论著摘要· BMP．7诱导脂肪干细胞微团培养下成软骨能力 的实验研究 目 的 比较脂肪干细胞在BMP．7存在时平面培养和微团培养两种方式下诱导分化成 软骨细胞的情况，探讨不同培养方式对脂肪干细胞成软骨能力的影响。寻求一种 更好的促进脂肪干细胞成软骨分化的培养方式。 方 法 细胞的分离和扩增，选用6周龄健康Wistar雄性大鼠，无菌条件下取大鼠双侧 腹股沟脂肪组织，眼科剪剪碎， O．1％的胶原酶37度震荡消化20分钟，含10％胎牛 于培养瓶中培养。每3天换液一次，待细胞生长至接近融合时胰酶／EDTA消化传代。 x105／ml，在BMP．7存在 将培养至第3代细胞胰酶／EDTA消化后计数，调整密度为1 条件下进行平面和微团培养。指标检测(1)光镜观察原代脂肪干细胞及诱导7， 2l天后的生长情况，流式细胞学检测脂肪间充质干细胞的表面标志； (2)MTT 法检测不同培养方式下脂肪干细胞的增殖能力；(3)免疫组织化学染色检测培养 三周后两组II型胶原表达，RT．PCR检测诱导14，21天后平面和微团培养组软骨特 异蛋白聚糖和II型胶原mRNA的表达及肥大软骨细胞的标志X型胶原mRNA的表 达。 结 果 脂肪干细胞的形态特征原代脂肪干细胞接种24dx时后光镜下可见有少量的 细胞贴壁，形态为短梭形或多角形，48小时后贴壁细胞明显增多，约9天左右细胞 融合超过90％。诱导7天后平面培养组细胞呈长梭形，微团培养组呈短梭形。诱导 21天后两组细胞形态均为圆形。流式细胞仪检测表明，脂肪间充质干细胞高表达 CD29和CD44，而CD34，CD45的表达均不足2％。 MTT检测结果表明平面培养组细胞增殖趋势平缓，lO天左右进入平台期。而 微团培养组各检测点MTT值均显著高于平面培养组，二者统计学有显著性 (PO．05)，表示微团组细胞的增殖要明显快于平面培养组，且微团培养组从生长 曲线上看未见明显的平台期。 免疫组化结果显示，培养三周后微团组II型胶原表达强阳性而平面组表达弱 阳性，RT-PCR结果显示培养14和21天后两组均有软骨特异蛋白聚糖和II型胶 原mRNA的表达，但微团组表达较强。而微团组培养2l天时其x型胶原mRNA 的表达弱于平面组。 结 论 在BMP．7诱导下脂肪干细胞可以向软骨细胞分化，同时微团培养比平面培养 更能促进脂肪干细胞的增殖、分化，并能更好的维持软骨细胞的表型，可以作为 组织工程构建软骨的理想选择。 关键词 干细胞；微团培养；软骨；分化 2 ·英文论著摘要· The theADSCsdifferentiateto of chondrocyte study uceil bliunermlCromasscuItuconoltlOn ablity_under BMP--7 by ob ．i the ofthe derivestemcellsdifferentiateinto cells ability adipose cartilage and the undertwo cultureormicromassinth