添加cox-2制剂塞来昔布治疗难治性癫痫模型大鼠的研.pdf

添加COX-2 抑制剂塞来昔布治疗难治性癫痫模型大鼠的研 究 摘 要 目的：将 COX-2抑制剂与抗癫痫药物的联合用于难治性癫痫治 疗，观察难治性癫痫的发作的情况，探讨抗癫痫药联合COX-2抑制剂 治疗难治性癫痫的机制，为临床治疗难治性癫痫提供一种新思路。方 法：1、实验分组：本实验设立5个实验组，分别为假手术组，难治性 癫痫模型生理盐水治疗组(生理盐水组) 、难治性癫痫模型卡马西平治 疗组（卡马西平治疗组）、难治性癫痫模型卡马西平联合塞来昔布治 疗组（联合治疗组）、难治性癫痫模型塞来昔布治疗组（塞来昔布治 疗组）。2 、动物模型的建立：a、模型组：采用海人酸海马快速点燃 方法建立癫痫大鼠模型，即将海人酸 （Kainic Acid ，KA ）1.5ug （1ug/ul）定点注入wistar大鼠右侧海马CA3区位置，注射区和额窦安 装电极，缝合后观察。按照 Racines分级进行行为观察同时进行脑电 图检测，若大鼠在0.5-6小时内出现3-5级痫性发作且脑电图都异常， 表明癫痫模型造模成功。b 、假手术组：将等量的生理盐水注入大鼠 右侧海马CA区注射，注射区和额窦安装电极，缝合后观察3、难治性 癫痫模型的建立：卡马西平灌胃每日两次，用量为125mg/kg，连续28 天，然后观察对大鼠的是否有痫样发作并测一次脑电图。 4 、筛选标 准：a、脑电图，正常的大鼠脑电图表现为5 ～ 12 Hz 的α波或17 ～ 19 Hz 的β波，波幅20 ～ 80 μV，即基础波，表现为有高幅尖波 等异于基础波的脑电波可作为诊断癫痫发作的依据；b 、按照Racines 分级观察：0 级: 正常; 1 级: 面肌痉挛, 如动须、节律性咀嚼等; 2 级: 节律性点头 ; 3级: 前肢痉挛; 4级: 站立并前肢痉挛或强直; 5 级: 持续站立或不能站立并跌倒,上下肢抽搐。发作达到1级及以上为 异常。c 、脑电图结果和行为观察结果都异常表明难治性癫痫模型造 模成功。5、药物治疗：5组实验组分别给予相应组的药物治疗28天。 6 、检测指标：观察大鼠癫痫发作情况、脑电图，p糖蛋白及COX-2 免疫组化检测实验结果。结果：1、联合治疗的疗效：治疗28天后， 大鼠癫痫发作程度及脑电图结果表明联合卡马西平和塞来昔布治疗 难治性癫痫模型比卡马西平单独治疗 （（p=0.044 ，p0.05 ）和塞来昔 布单独治疗 （p=0.012 ，p0.05 ）疗效好。2 、单药物治疗效果：塞来 昔布治疗组、卡马西平治疗组和生理盐水治疗组三组间的疗效无差别 （p=0.50 ，p0.05 ），表明卡马西平或塞来昔布单独治疗难治性癫痫无 效果。 3、、塞来昔布对难治性癫痫模型大鼠脑组织中COX-2和p糖蛋白的影响：通过免 疫组化检测发现联合治疗组中大鼠大脑中 p糖蛋白及 COX-2 的含量比生理盐水组4 、大鼠 脑组织中COX-2与p糖蛋白的相关性：治疗28天后，通过光密度分析 大鼠脑组织中p 糖蛋白与COX-2 的含量，结果显示：大鼠脑组织中 COX-2与p糖蛋白呈直线正相关关系（r=0.777 ），提示在本实验中p糖 蛋白的表达与cox-2有关。5、COX-2表达高低对治疗效果的影响：将 卡马西平治疗组与联合治疗组的难治性癫痫模型大鼠中， COX-2低 表达模型大鼠 的药物治疗效果 比高表达模型大鼠 治疗效果好 （p=0.025，p0.05 ）。6、p糖蛋白表达高低对治疗效果的影响：在卡 马西平治疗组与联合治疗组的难治性癫痫模型大鼠中，p糖蛋白低表 2 达模型大鼠的药物治疗效果比高表达模型大鼠治疗效果好 （p=0.028 ， p0.05 ）。结论：cox-2抑制剂塞来昔布联合抗癫痫药物卡马西平治疗 难治性癫痫模型大鼠能使大鼠发作明显减少，同时COX-2及p糖蛋白 表达减少，表明难治性癫痫的控制与COX-2及p糖蛋白的表达减少相 关。推测塞来昔布联合卡马西平治疗难治性癫痫的机制可能是通过 COX-2抑制剂抑制COX-2表达，导致p糖蛋白表达减少，从而使卡马 西平在脑组织中浓度上升，最终减少难治性癫痫的发作。 关键词：多药物耐药；环氧化酶-2 ；p-糖蛋白；难治性癫痫 3 The curative e