腺病毒介导的人粒酶逆转录酶启动子二步转录增强系统htertp-tsta在卵巢癌中转录活性的研究.pdf

…III I III l l l I III IlllUI 892716 Y1 目 录 一、摘要 中文摘要…………………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………………3 二、英文缩略语………………………………………………………………………5 三、论文 第一部分RGD修饰型腺病毒的制备 前言……………………·………………………………………………………··8刖舌……………………“………………………………………………………’8 材料和方法………………………………………………………………………8 结果………………………………………………………………………………9 讨论………………………………………………………………………………10 附图………………………………………………………………………………11 癌细胞及正常细胞中转录活性的检测 前言………………………………………………………………………………14 日U舌………………………………………………………………………”……。14 材料和方法………………………………………………………………………14 结果………………………………………………………………………………16 讨论………………………………………………………………………………24 结论………………………………………………………………………………25 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………26 五、参考文献…………………………………………………………………………27 六、附录 综j苤………………………………………………………………………………29 致谢………………………………………………………………………………38 个人简介…………………………………………………………………………39 ·中文论著摘要· 腺病毒介导的人端粒酶逆转录酶启动子二步转录增强 系统hTERTp．TSTA在卵巢癌中转录活性的研究 研究背景 卵巢上皮细胞癌目前仍是严重威胁广大妇女健康的恶性肿瘤。寻求传统手术、 放化疗之外的新的疗法十分必要。在卵巢癌的生物治疗中，基因治疗备受瞩目。 已有愈来愈多的转基因治疗进入临床研究。为了防止促凋亡基因对正常细胞的毒 性作用，实现治疗基因在肿瘤组织中的靶向表达十分必要。应用肿瘤特异性启动 子(tumor specific 包膜基因进行修饰，改变病毒对细胞的CAR嗜性为整合素嗜性，来提高病毒对卵 巢癌细胞的感染水平，是行之有效的方法之一。 研究目的 中的转录活性。 、 研究方法 应用Ad．Max系统将各重组腺病毒载体包装成重组腺病毒并鉴定、纯化及扩 增。 应用荧光显微镜检测各启动子系统调控下表达EGFP的重组腺病毒感染卵巢 activated 殖和毒性分析，并应用流式细胞术的荧光激活细胞分类器(fluorescence cell sorter,FACS)对感染的不同细胞进行荧光定量检测，检测细胞的发光强度。 研究结果 1、载体构建与病毒制备：成功制备RGD修饰型腺病毒载体CTD010．1及 CTD01 重组腺病毒，分别命名为Ad．EGFP和Ad．hTERT-TSTA—EGFP。 2、各启动子系统在卵巢癌细胞和正常细胞中的转录活性： SKOV3 后其EGFP表达水平分别是Ad．EGFP感染后的4倍、1．6倍和2．6倍； 平只