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m Cart．1和M p3蛋白在Mscs和软骨细胞中的差异表达 硕士研究生： 李霭峰 指导教师： 翟立杰 教授 指导小组： 王志强 教授 专业名称： 耳鼻咽喉科学 摘 要 背景和目的：组织工程软骨是将软骨细胞与细胞外基质合成类正常 软骨并且有功能的组织。其研究内容涵盖了种子细胞，生长因子，支架 stem cell，MSCs)为 材料三方面。已证实骨髓间充质细胞(Mesenchymal 软骨组织工程中理想的种子细胞。生长因子具有促进细胞分化和增殖的 重要作用，是决定MSCs分化方向的最主要因素。本课题组的前期实验 已经利用基因芯片与生物信息学技术对大鼠MSCs，透明软骨细胞和弹 性软骨细胞的差异表达基因进行了分析，结果显示软骨同源蛋白一1 (cartilagehomeoprotein metallopeptidase 3，Mmp3)在软骨细胞中高度表达，可能是诱导MSCs 向软骨细胞分化的关键基因。研究表明Cartl促进软骨细胞外基质II型 胶原纤维的含量，而Mmp3调节软骨细胞外基质含量使之处于动态平衡。 这两种基因在软骨细胞中高表达提示它们在软骨细胞形成过程中发挥重 要作用。本实验通过Western 明软骨细胞和弹性软骨细胞中的差异表达进行了蛋白质水平的验证，为 下一步实验选择准确的生长因子来定向分化MSCs向软骨细胞方向分化 奠定理论基础。 方法：通过密度梯度离心法和贴壁培养法的联合应用提取SD大鼠的 MSCs，酶消化法得到肋软骨透明软骨细胞和耳廓弹性软骨细胞，分别培 养2—3代后提取细胞总蛋白，Western 平的表达并进行定量分析。 结果： 1、 密度梯度离心结合贴壁培养法能分离出较为纯化的MSCs，细 胞大都呈梭形贴壁生长，流式细胞仪测定其细胞表型结果符合MSCs的 特性。 2、 Western Blot定量分析表明：(1)透明软骨细胞中Cart．1的表 达明显高于MSCs(P0．0 1)，弹性软骨细胞中Cart．1蛋白的表达也高于 MSCs(PO．0 1)，而透明软骨细胞和弹性软骨细胞中Cart．1蛋白的表达 没有明显差异(PO．0 1)。(2)Mmp3蛋白在透明软骨细胞表达高于MSCs 弹性软骨细胞中Mmp3蛋白表达高于透明软骨细胞中Mmp3蛋白表达(P O．01)。 结论： l、 密度梯度离心法结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠MSCs。 2、 骨细胞分化过程中起定向诱导作用，提示Cart．1蛋白可能为定向诱导 MSCs向软骨细胞分化的重要备选生物因子。 3、 Mmp3蛋白在弹性软骨细胞中高表达说明Mmp3可能在MSCs 向弹性软骨细胞分化过程中起定向诱导作用，是MSCs向弹性软骨细胞 方向分化的关键基因。 关键词：软骨同源蛋白．1 基质金属蛋白酶3 软骨细胞 组织工程 2 in Cart-·1and MSCs Differential of Mmp3 Expression and Chondrocytes Master candidate：Li degree Aifeng