17β-雌二醇防早产儿视网膜病变的实验研究.pdf

17β-雌二醇预防早产儿视网膜病变的实验研究 中 文 摘 要 第一部分 早产儿视网膜病变（ROP ）模型的建立 目的：:建立符合早产儿视网膜病变( ROP)病理特点的大鼠模型。 方法：选择 7 日龄新生 Sprague Dawley （SD ）大鼠24 只，随机分 为正常组和单纯高氧组，将单纯高氧组的12 只鼠置于氧浓度75% 的 容器内连续饲养5 天，再置于正常空气环境中饲养至17 日龄；正常 组的 12 只鼠在正常空气环境下饲养至 17 日龄。通过以下方法观察 两组视网膜血管改变：视网膜切片常规 HE 染色，计数突破视网膜 内界膜的新生血管内皮细胞核数；视网膜铺片经ADP 酶染色，了解 视网膜血管形态的改变。结果：P17 时正常组新生鼠突破内界膜的血 管内皮细胞核数达0.91 ±0.79 个，单纯高氧组22.00 ±2.98 个，差异 有显著性意义（P 〈0.01 ）；视网膜铺片显示单纯高氧组视网膜丧失正 常的两层血管网结构，血管分布紊乱，可见大片无灌注区，无灌注区 边缘见新生血管芽；正常组同龄小鼠示视盘周围放射状分布的视网膜 血管主干较粗，毛细血管网发育良好，无明显无灌注区及新生血管芽。 结论：该视网膜病动物模型与早产儿视网膜病变相似，制备过程简便， 可重复性高，并可进行定量研究，故该模型是研究早产儿视网膜病变 较为理想的模型。 1 关键词 早产儿视网膜病（ROP ），动物模型，新生血管，氧致视 网膜病（OIR ） 第二部分 雌二醇对ROP 大鼠模型中视网膜新生血管的作用 目的：进行雌二醇抑制ROP 新生血管的实验研究，并探讨其机 制。方法：选择7 日龄新生SD 大鼠88 只，共分为4 组,每组22 只。 组1 为正常组，组2 为单纯高氧组：将7 日龄大鼠置于密闭容器内， 调节氧气流量，使容器内氧浓度保持在75% ，饲养5 d 至小鼠 12 d 龄，然后置于正常空气环境下饲养至 17 d 龄。组3 为雌二醇干预组： 饲养同组 2 ，但在小鼠7 日龄起行皮下注射17β-雌二醇(E2 ，溶媒稀 释，配制浓度为分别为2g/L) ，体积为0.5µL ，一次/d 至小鼠17 d 龄。 组7 为溶媒干预组，饲养及给药方法同雌二醇干预组，注射溶剂改为 相同体积的溶媒。通过HE 染色、视网膜铺片观测血管改变和增生情 况，免疫组化及RT-PCR 检测VEGF 、MMP-2 在分子及mRNA 水平 的表达。结果：突破内界膜的内皮细胞数四组比较差异有统计学意义 (P0.05)，单纯高氧组新生血管较多，有的形成血管索，内皮细胞数 较正常组明显增多(P .0.05)，雌二醇干预组内皮细胞数较单纯高氧组 及溶媒干预组明显减少(P0.05) ；视网膜铺片可见雌二醇干预组较之 单纯高氧组血管网有不同程度的改善，血管结构清晰，形态基本正常； 免疫组织化学染色显示雌二醇干预组 VEGF 、MMP-2 表达量较之单 纯高氧组及溶媒干预组明显减少(P .0.05) ；RT-PCR 结果显示: 雌二 2 醇干预组与单纯单纯高氧组及溶媒干预组之间 VEGF mRNA 和 MMP-2 mRNA 表达的差异具有统计学意义（P .0.05) 。结论：17 β- 雌二醇可在一定程度上抑制ROP 新生血管的产生，机制可能是抑制 了VEGF 及MMP