联合应用反应停抗vegf单抗靶向抑制荷hlt;,22gt;肝癌小鼠肿瘤生长的实验研究.pdfVIP

中文摘要 联合应用反应停与抗VEGF单抗靶向抑制 荷H22肝癌小鼠肿瘤生长的实验研究 摘 要 目的：依据靶向阻断新血管生成可有效抑制肿瘤生长的 原理，研究联合应用抗VEGF单抗与反应停两种抗血管生成 药对荷Hzz肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用，探讨联合应用抗 VEGF单抗与反应停作为一种新型抗肝癌方式的可行性。 方法：1小鼠肝癌移植瘤模型的建立：60只纯系清洁级 种植癌细胞，取小鼠左后肢大腿外侧为种植点，抽取0．2ml 肿瘤细胞悬夜 约含4×106个细胞 注入种植点皮下。 2动物分组及肿瘤生长观察：肿瘤种植后1w，可观察到 全部小鼠有明显皮下肿块形成，第10日选取其中肿瘤生长良 好肿块直径约5mm的小鼠40只，将动物随机分为4组，即盐 水组 对照组 ，抗体组，反应停组，抗体加反应停组，每 组10只。用游标卡尺测量肿块长径 a 及横径 b ，每日测量1次， 肿瘤体积 V a×b2／2。 3药物给予：肿瘤接种后lOd即分组当日开始给药，对 照组每日每只经尾静脉注射生理盐水0．2ml；反应停组灌胃反 经尾静脉注射抗VEGF单抗0．2ml；联合组每日每只灌胃反应 VEGF单抗0．2ml。连续给药12d。 4瘤体称质量：抗体给药结束后继续观察肿瘤生长2w， 中文摘要 于肿瘤种植后36d处死动物，称鼠重，取瘤组织，仔细分离肿 块周边皮肤及非肿瘤组织，瘤体称质量并计算瘤质量抑制率， 瘤质量抑制率 ％ 卜实验组平均瘤质量／对照组平均瘤质 o／60。 量 ×100 5免疫组化微血管密度 MVD 测定：将肿瘤组织切成 3mm厚片状，40∥L甲醛固定24h，脱水石蜡包埋，切片厚5岬． 免疫组化SABC法：一抗为多克隆兔抗鼠CD34抗体，工作浓 作按试剂盒说明进行，DAB染色，苏木素复染，树胶封片。选血 管内皮细胞染色密集区于高倍镜 ×200 下计数染色细胞，每 片计数5个视野取平均值。 水化后，用3％过氧化氢去除内源性酶，微波抗原修复，然后加 入兔抗人VEGF抗体，DAB显色，苏木精复染，光镜观察结果。 分别用己知阳性的肝癌组织切片作阳性对照，正常小鼠和兔 血清及PBS代替一抗作阴性对照。细胞浆或核呈棕黄色颗粒 状分布者为阳性染色。阳性染色细胞≤10％者为阴性表达，细 胞阳性染色 lO％者为阳性表达。 7统计学处理：各项计量资料指标均以均数±标准差 13．0统计软件进行统计分析，应用 X±s 表示，应用SPSS 重复测量数据方差分析处理肿瘤体积变化数据，多个独立样 本非参数检验处理瘤质量抑制数据、MVD及VEGF表达率数 据，P 0．05为差异有统计学意义。 结果：l抗VEGF单抗与反应停对肿瘤生长的抑制情况： 种瘤后10d即动物分组时各组肿瘤体积无显著性差异，给药 6d后，与对照组相比，各实验组肿瘤生长呈现减慢趋势，但各 中文摘要 组差异不显著。种瘤后20d虽lJ给药后10d，抗体组、反应停组 和联合组肿瘤体积显著小于对照组，且联合组 抗体组 反 应停组，此显著性差异一直持续至动物处死 种瘤后36d 。 2瘤质量抑制率：反应停组、抗体组和联合组在动物处 明显抑制肿瘤质量增长作用，联合组瘤质量明显低于反应停 组和抗体组。 3肿瘤组织微血管测定 MVD ：免疫组化法处理结果 显示，各实验组MVD低于对照组，联合组较反应停组与抗体 组MVD低，MVD在抗体组与反应停组之间差异无统计学意 义。 4VEGF表达率测定：免疫组化法处理结果显示，各组 VEGF表达率分别为：反应停组45％、抗体组35％、联合组 25％，显著低于对照组80％。 结论：本实验研究结果显示，虽然反应停与抗VEGF单 抗两种药物抗血管生成作用基理不同，但在抗H22转移瘤新生 血管生成上有协同作用，并且这两种药相对于肿瘤患者来说 使用限制较少，易于普及，有望为临床提供一种新的肝癌治 疗方式。 关键词：肝癌；小鼠；抗VEGF单抗；反应停；靶向治 疗 英文摘要 withanti-VEGF incombination Thalidomide monoclonal DutchH22 inhibitory antibodytargeting tumor inmice livercancer growth Study ABSTRACT for new blocker angiogenesis targeting Objective：Basis tumor on can inhibit Principle，study effectively growth with monoclonal in combination anti．VEGF antibody H22liver intwo onDutch