pdcd5基因大肠癌中的表达及其对药敏的影响.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘要…………………………………………………………………l 英文论著摘要…………………………………………………………………3 二、英文缩略语……………………………………………………………………5 三、论文 ．，．一’． 刖吾……………………………………………………………………………6 实验材料与方法………………………………………………………………6 实验结果(附论文图片)……………………………………………………1l 讨论……………………………………………………………………………19 结论……………………………………………………………………………2l 四、本研究创新性的自我评价……………………………………………………22 五、参考文献………………………………………………………………………23 ’ …六、附录 综j苤……………………………………………………………………………25 在学期间科研成绩……………………………………………………………33 致谢……………………………………………………………………………34 个人简介………………………………………………………………………35 ·中文论著摘要· PDCD5基因在大肠癌中的表达及其对药敏的影响 目 的 PDCD5基因是北京大学人类疾病基因中心从白血病细胞系TF．1细胞中克隆 得到的、具有自主知识产权的新功能基因。PDCD5基因在多种肿瘤如宫颈癌、肝 癌、多发性骨髓瘤、胃癌、肺癌等疾病中表达下降，可能与其发生有关，但其在 肿瘤癌变过程中所起的作用并不十分清楚。大肠癌是常见的消化道肿瘤，在肿瘤 疾病发生发展过程中具有典型多阶段性。为了明确PDCD5基因在肿瘤发生发展过 程的作用，我们选取在大肠癌变过程中的不同阶段的组织，以及大肠癌细胞系， 分别从组织水平、细胞蛋白水平及mRNA水平明确PDCD5基因在大肠癌疾病不 同阶段的表达，初步探讨其在癌变过程中的作用：同时对其临床预后做了随访调 查，明确其临床意义。为了进一步探讨PDCD5基因在治疗方面的作用，我科成功 构建了携带PDCD5基因的重组慢病毒载体；在本研究中，将上述重组载体转染结 肠癌细胞系HCTl16，使PDCD5基因过表达，进而检测转染前后HCTl16细胞增 殖能力和凋亡细胞比例的变化，期望能为肿瘤治疗提供新的方法。 方 法 肉及28例慢性炎症患者的组织应用S．P免疫组化方法检；澳tJPDCD5基因在其中的表 达，并与临床资料比较，对其中46例大肠癌患者进行电话随访预后。选取大肠癌 PDCD5的功能性研究方面，选择慢病毒作为载体，应用本室保存的携带PDCD5基 因的重组慢病毒L-PDCD5及对照慢病毒空载体L-null，稳定转染大肠癌细胞系 HCTll6，并常规传代培养。化疗药物5．如设定5个浓度诱导转染前后细胞凋亡，利 用MTT法测定各组细胞增殖能力改变，计算出5．fIl的半数抑制浓度；根据MTT结 细胞术测定各组细胞凋亡的变化，以明确PDCD5对于化疗药物的增敏作用。 结 果 PDCD5在慢性炎症组织中表达最高，明显高于腺瘤性息肉及癌组织中的表达 (f=10．495，P0．05)，但在腺瘤性息肉和癌组织、以及不同分级的大肠癌之间的 表达无明显差异(／-41．552)；随访病例中PDCD5表达高的患者，生存评分较高。 PDCD5在人脐静脉内皮细胞株Huvec中表达高于结肠癌细胞株中的表达。目的基 率达80．90％，转染后细胞可以传代培养，荧光显微镜下能直接观察到绿色荧光存 明显高于未转染的细胞。MTT法结果显示L-PDCD5组细胞的抑制率在各个浓度显 和L-null组(37．48％)；且随着药物浓度增加，细胞凋亡率增加。 结论 PDCD5基因可能不同程度地参与了大肠组织细胞癌变过程的调控，特别在癌 变早期作用较为明显；携带PDCD5基因的重组慢病毒载体转染大肠癌细胞系 HCTll6能够稳定表达；这种稳定表达，使大肠癌细胞对化疗药物更加敏感，并 呈现浓度依赖性。