人卵巢癌类干细生长特性的实验研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 人卵巢癌类干细胞生长特性的实验研究 目 的 卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤，其死亡率居妇科恶性肿瘤首位，目 前已成为严重威胁妇女生命和健康的主要肿瘤，其主要特征是肿瘤细胞的恶性生 长、转移、复发及化疗耐药，病因和发病机制尚不清楚，最近研究认为，肿瘤中 存在-d,群具有自我更新和分化潜能的细胞，即肿瘤干细胞，这种细胞具有干细 胞特性，例如非锚着性生长，自我更新和无限增殖，多向分化潜能和天然耐药性， 对化疗药物易产生抵抗作用，它们可能是肿瘤转移和复发的根源。目前为止，研 究人员已经在白血病、乳腺癌以及中枢神经系统肿瘤中分离并鉴定出了肿瘤干细 胞，另外，在肺癌、前列腺癌和卵巢癌中也发现了肿瘤干细胞，由于干细胞在体 外很难分离纯化，长期传代，所以为临床治疗带来困难，我们的前期实验已经从 卵巢癌细胞系中成功分离出卵巢癌类干细胞，在此基础上，我们探讨卵巢癌类干 细胞冻存复苏的条件及保存传代的方法，通过计数细胞数的方法绘制细胞生长曲 线、计算分裂指数，了解卵巢癌类干细胞的生长特性，为进一步从肿瘤干细胞方 面研究肿瘤的耐药机制提供可信的理论依据，从而为临床上卵巢癌的治疗提供更 多的可行性。 材料与方法 一、材料 1、细胞系 卵巢癌细胞系OVCAR3由中国医科大学附属盛京医院妇产科周欣老师惠赠。 2、主要试剂 DMEM／F1 的6孔细胞培养板(Coming)、甘油(GlycerolBiosharp 试剂三厂)、FBS(天津颢洋生物制品科技有限责任公司) 3、主要仪器 biotech C02孵箱(RSgalaxyS)、超净工作台(ESCObiotech$Ve一4A1)、倒置相 差显微镜(OU伊US) 二、方法 采用无血清悬浮培养的方法提取卵巢癌类干细胞并进行冻存和复苏，细胞计 数法绘制生长曲线、计算分裂指数。 实验结果 1、细胞培养的形态学观察 将贴壁细胞消化后，通过无血清培养可获得具有非锚着性悬浮生长的细胞球， 其在超低吸附培养板中和琼脂铺板的培养皿中细胞球形态基本相同(前期的实验 结果已经初步证实我们获得的细胞球富集卵巢癌类干细胞，具有自我更新、无限 增值的能力)。 2、卵巢癌类干细胞的传代培养 从贴壁细胞中提取出卵巢癌类干细胞后可以连续传代达14代以上。 3、细胞冻存复苏实验 用两种冻存液冻存的细胞经复苏后生长状态均良好，传代一次后计算增殖情 况无明显差别。 4、生长曲线 细胞在最初3天内生长速度较缓慢，曲线基本成平线状，第4天开始出现对 数期生长；悬浮细胞的生长速度较贴壁细胞缓慢。 5、分裂指数 贴壁细胞在72小时前分裂指数呈上升趋势，72小时达到峰值，而后分裂指 数逐渐下降。 结论宝口 -’匕 1、将贴壁细胞消化后，通过无血清培养可获得具有非锚着性悬浮生长的细胞 2 球，其可在无血清条件下连续传代十数代以上，并保持非锚着性悬浮生长的特性。 11 +8％DMSO(4001)来冻存细胞结果最为简单合适。 3、人卵巢癌类干细胞的生长曲线比传代培养细胞更平缓，发展趋势更缓慢， 这与干细胞处于慢周期的生物学特性相一致。 关键词 干细胞肿瘤干细胞冻存和复苏生长曲线分裂指数 3 ·英文论著摘要· on characterofhumanovarianstem--like Studygrowth cells ective Obj carcmomaisthecommon tumorinfemale Ovarian