微量肉汤稀释法测幽门螺杆菌耐药性研究.pdfVIP

f．!￡三!：三 中文 微量肉汤稀释法检测幽门螺杆菌抗生素耐药性研究 摘 要 目的：l比较微量肉汤稀释法及琼脂稀释法两种方法检测幽门螺杆菌 抗生素耐药性的结果，探索更适用于临床的检测方法。2．测定甲硝唑、 替硝唑、奥硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素及利福平等六种药物对幽门螺杆 菌最低抑菌浓度，计算耐药率，为临床抗lip治疗提供理论依据，指导临 床医生合理使用抗生素。 方法：美国临床实验室标准化研究所规定琼脂稀释法作为检测lip抗 菌药物敏感性的研究方法，但是这种技术费时费力、价格昂贵，我们运用 年02月在我院进行胃镜检查并做了幽门螺杆菌培养的慢性胃炎、消化 道溃疡、胃食道反流及胃癌的病人220人，经胃镜活检，细菌鉴定培养， 最终共分离菌株42株，取自42位病人。试验所需抗菌药物粉末均由Sigma 公司生产，所有的药物均在使用当天按照临床实验室标准化研究所 门螺杆菌的耐药率。每株菌用一个灭菌的96孔聚苯乙烯板进行试验，第 一排加甲硝唑；第-t4}3D替硝唑；第三排加奥硝唑：第四排加左氧氟沙星； 第五排加克拉霉素；第六排加利福平。第七排和第八排不加药，作对照试 验。将奥硝唑、替硝唑、甲硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素及利福平有效浓 度按倍比稀释的方法共配制成12个浓度，按由高浓度到低浓度的顺序依 次加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中。将用直接菌：悬液法制备的浓度相当于 孔聚苯乙烯板每个孔中，然后将96孔聚苯乙烯板装罐，密封，用日本 气体，最后将密封罐置35—37。C温箱中培养72小时。以在小孔内完全抑制 细菌生长的最低药物浓度定为MIC。当阳性对照孔(即不含抗生素)内 细菌明显生长试验才有意义。当在微量肉汤稀释法出现单一的跳孔时，应 记录抑制细菌生长的最高药物浓度。如出现多处跳孔，则重复试验。将每 中文摘要 个菌株同时进行琼脂稀释法检测药物耐药性。按NCCLS标准采用琼脂稀 释法。药物配制方法同上，将药物按由高浓度到低浓度的顺序倍比稀释依 次加到灭菌的琼脂培养基中，配制成含不同抗菌药物浓度的琼脂平板。将 浓度相当于2．0麦氏比浊标准的菌悬液依次加入含不同药物浓度的琼脂平 板上，每株菌液加2#1。将琼脂平板装罐，密封，注入含有微氧的混合气 体，置35．37。C温箱中培养72小时。以无菌生长的药物最低稀释度作为最 43504及／或ATCC43526质控菌株 低抑菌浓度(MIC)。每次试验用ATCC 作参照。 统计学处理：用SAS9．0软件进行统计分析，采用配对卡方检验比较 两种检测方法测得药物耐药率之间的差异，采用卡方检验比较六种药物耐 药率之间的差异，计算zz值，P0．05为差异有统计学意义。计算每种药 物的其几何平均数，MIC50和MIC90。 结果： (1)试验发现两种方法有良好的相关性，R值在0．87至O．96 之间。经配对卡方检验，证实微量肉汤法和琼脂稀释法检测抗生素药物耐 释法测得甲硝唑、替硝唑及奥硝唑耐药率分别为73．81％、71．43％、69．05％； 为：甲硝唑与替硝唑：O．33，甲硝唑与奥硝唑：O．77，替硝唑与奥硝唑： O．20))，克拉霉素耐药率21．43％； 左氧氟沙星耐药率 (z2=O．07)； 23．81％，两种药物耐药率无显著性差异，P0．05。分析克拉霉素与甲 和左氧氟沙星耐药率低于对硝基咪唑类。利福平耐药率为O．明显优于其他 抗生素。(3)用微量肉汤稀释法测甲硝唑、替硝唑、奥硝唑、左氧氟沙星、 (4)用琼脂 14．73#g／ml13．57肛g／皿1．12肛g／m】、o．64ug／m1、0．01#g／ml。 稀释法测甲硝唑、替硝唑、奥硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素及利福平等六 中文摘要 MIC90依次为64／zg／ml、128肛g／ml、128#g／ml、32肛g／ml、16#g／ml、 11．1 1 3#g／