糖尿病膀胱病变尿肌中c-kit基因和蛋白表达变化及意义.pdf

摘 要 目的：1．观察豚鼠膀胱cajal 样细胞形态学特点并结合该细胞具有的特殊功能，探讨cajal 样细胞在 膀胱组织中的类型。 2 ．研究豚鼠糖尿病性膀胱病（DCP ）逼尿肌中cajal 样细胞的形态、分布及数量变化，探讨DCP 逼 尿肌功能障碍是否与cajal 样细胞异常相关。 3 ．检测豚鼠DCP 逼尿肌中c-kit mRNA、c-kit 蛋白的表达水平，探讨c-kit 基因表达与DCP 中cajal 样细胞异常关系及其发生机制。 方法：1．65 只豚鼠随机分成对照组20 只，实验组45 只，实验组采用链脲佐菌素单次腹腔注射建 立糖尿病豚鼠模型，饲养 10 周后运用尿动力学检测将实验组筛选出 DCP 组和糖尿病性非膀胱病 （NDCP ）组。 2 ．豚鼠膀胱制成冰冻切片，特异性免疫荧光染色标记膀胱cajal 样细胞，在激光共聚焦显微镜（LCSM ） 观察膀胱组织中cajal 样细胞的形态类型、分布及数量。 3 ．体外培养膀胱cajal 样细胞，应用Fluo-4AM 标记细胞内钙离子浓度含量，采用LCSM 观察记录 其钙离子振荡功能。 4 ．采用RT-PCR 及LCSM 检测技术分别检测各组膀胱组织c-kitmRNA 及c-kit 蛋白的表达。 结果：1．单体cajal 样细胞分布在粘膜下层及肌层，二聚体cajal 样细胞分布在肌层，肌层中二聚体 cajal 样细胞分布密度少于单体cajal 样细胞（P ＜0.05) 。 2 ．二聚体cajal 样细胞组钙离子振荡频率及振幅明显高于单体cajal 样细胞组频率(P ＜0.01)及振幅(P ＜0.05) ；二聚体cajal 样细胞2-APB 抑制组频率及振幅明显低于二聚体cajal 样细胞组频率(P ＜0.01) 及振幅(P ＜0.01)，单体cajal 样细胞2-APB 抑制组频率及振幅与单体cajal 样细胞组相应参数比较无 显著统计学差异(P ＞0.05) 。 3 ．DCP 组两类cajal 样细胞突起变短、变钝及两类 cajal 样细胞网络样连结破坏，并伴有两类 cajal 样细胞数量明显减少，DCP 组单体cajal 样细胞及二聚体cajal 样细胞平均阳性面积百分比较正常对 照组单体cajal 样细胞（p ＜0.05 ）及二聚体cajal 样细胞（p ＜0.01 ）显著降低。 4 ．RT-PCR 结果显示，DCP 逼尿肌中c-kitmRNA 表达较对照组（p ＜0.01 ）及NDCP 组（p ＜0.05 ） 显著降低，NDCP 组膀逼尿肌中c-kitmRNA 表达与对照组比较无显著统计学差异（p ＞0.05 ）。 5 ．LCSM 半定量分析结果显示，DCP 组c-kit 蛋白表达明显低于对照组（p ＜0.01 ）与NDCP 组（p ＜0.01 ），NDCP 组膀逼尿肌中c-kit 蛋白表达与对照组比较无显著统计学差异（p ＞0.05 ）。 结论：1．正常豚鼠膀胱组织中存在有单体及二聚体两种不同形态类型cajal样细胞样细胞。 2 ．两类cajal样细胞数量减少和形态异常在DCP发病机制中可能扮演了重要角色。 3 ．DCP豚鼠膀胱中cajal样细胞异常与逼尿肌中c-kitmRNA、c-kit蛋白表达减少有关，因此基因表达 异常可能是DCP 的发病机制之一。 关键词： 尿动力学；逼尿肌；cajal 样细胞；糖尿病性膀胱病；c-kit I Abstract Object ：1．To observe the morphological feature and special function of cajal-like cells and discuss the types of cajal-like cells ． 2 ．To study the morphology and quantity of cajal-like cellsin detrusor guinea pigs of diabetic cystopathy (DCP) and to explore the correlation between abnormalities of cajal-like cells and DCP ． 3 ．To determine the expression of c-kit