组织工程方法修大鼠棘上、棘间韧带的实验研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 组织工程方法修复大鼠棘上、棘间韧带的 实验研究 目 的 脊柱骨折的患者常并发棘上韧带、棘间韧带损伤。但是韧带损伤后不愈合或 瘢痕愈合，常导致明显的关节功能丧失和疼痛。而且尽管韧带损伤后可以自愈， 但愈合后韧带的超微结构及生化构成发生了很大改变，即使在韧带愈合后若干年 内，其生物力学特性仍较正常韧带差。近年来国内外的学者尝试采用生物学的方 法来促进韧带的愈合。其主要方法有细胞因子治疗、基因治疗和组织工程方法等。 stem 骨髓间充质干细胞(Mesenchymalcells，MSCs)．作为干细胞的一种，具有多 方向分化的潜能。本实验以MSCs为种子细胞，用组织工程的方法来促进韧带的 愈合。观察该方法促进大鼠棘上、棘间韧带损伤愈合的效果。 方法 一、MSCs的体外培养 X 利用密度梯度离心法分离获取大鼠股骨MSCs。以2．0105／mL的密度接种 于DMEM培养液中。原代细胞增殖达到铺满瓶底约80％时，按l：3比例进行传代。 二、细胞—胶原海绵复合体的制备 在第三代细胞的培养液中加入3 BrdU培养24d,时予以标记。然后用胰 mg／L X 蛋白酶消化，并制成细胞悬液，用DMEM培养液稀释成10106／mL的浓度，将 其滴到已用紫外线消毒的胶原海绵上，5％C02孵育箱中37C恒温培养24d,时， 使细胞吸附于胶原海绵上制成细胞一胶原海绵复合体。 三、动物模型的建立 切断大鼠I，4--I，5间的棘上、棘间韧带。实验组将细胞一胶原海绵复合体移植 于损伤处，对照组仅移植以胶原海绵。 四、HE染色 1 于移植后第4周处死动物，切取标本，作组织学检查。每个标本选取一张切片 进行HE染色。 五、免疫组化染色 再次选取每个标本的切片，做免疫组化染色。胞核棕黄色者为阳性染色细胞。 结果 一、MSCs的体外培养 倒置显微镜下观察可见，MSCs接种3天后即有部分细胞贴壁。培养12．14 天细胞生长成单层。传代后，MSCs增殖明显加快9．10天既可融合成单层。 二、动物模型结果 20只动物均存活良好。 三、组织学观察结果 实验组术后4周可见6例移植处形成韧带样组织，可见形态一致、排列方向 与正常组织接近的成纤维细胞，类似正常韧带组织。对照组所形成的新生组织含 较多脂肪组织且细胞排列紊乱，胶原纤维呈松散网丝状。两组问愈合较优者所占 比率的差异具有显著性(P0．05)。 四、免疫组化结果 于实验组切片可见胞核为棕褐色的阳性细胞。对照组未见阳性染色细胞。 讨论 MSCs为较为理想的种子细胞。使用I型胶原作为载体也较为合理。修复损伤 韧带的部分组织来源于移植的MSCs。MSCs在不添加外源性生长因子的情况下， 可在体内对韧带缺损进行有效修复。实验组韧带恢复较好，对照组恢复的相对较 差。 结论 应用组织工程技术以MSCs修复棘上、棘间韧带损伤具有可行性。该方法可 以促进韧带的愈合，其愈合效果好于韧带自然愈合的效果。 2 关键词 干细胞；骨髓；组织工程；韧带 3 ·英文论著摘要· of rats