番红花球茎蛋白聚糖抗肿瘤的研究及在愈伤组织中的诱导.pdf

摘要 恶性肿瘤一直是全世界人类的主要致死原因，每年剥夺超过600万人的生 命。化疗是目前治疗恶性肿瘤的主要手段之一。虽然国内外抗肿瘤药众多，但是 大多数药物都伴随着严重的毒副作用，因此继续寻找高效低毒的新型抗肿瘤药物 成为研究的热点。从中药活性成份中筛选治疗癌症的药物是目前本领域研究的一 个重要方面。 本研究采用50 mM，pH8．0的三羟甲基氨基甲烷．盐酸缓冲液(Tris．HCI)，其 中含有lmM的苯甲基磺酰氟(PMSF)、5mM的二硫苏糖醇(Drr)对番红花 (Crocussativus厶)球茎中的多糖进行提取，经DEAE柱层析和反相HPLC，纯 化得到了一个单一的多糖组分。硫酚法和Folin一酚法结果表明该多糖中糖和蛋白 生法和间羟联苯法，检测结果表明该蛋白聚糖是一个杂聚多糖，主要由鼠李糖 和糖醛酸(7．92％)组成。氨基酸自动分析仪结果表明该蛋白聚糖的蛋白质部分 核磁共振结果证明该蛋白聚糖具有典型的多糖和蛋白的结构官能团，并确定其主 链可能为p．(1，4)一D甘露糖，侧链包括p一(1，6)-D甘露糖及其他种类单糖，如鼠李糖 左盘 寸。 蛋白聚糖的体内外抗肿瘤作用进行了初步研究。SRB法体外毒性试验结果表 明，该蛋白聚糖对肿瘤细胞具有强烈的体外杀伤作用，对人肺癌A549细胞，人 子宫颈癌Hela细胞，人肝癌SMMC．7721细胞，人乳腺癌MCF7细胞，人胃癌 SGC．7901细胞等5种人组织来源的肿瘤细胞和1种鼠源的肉瘤S180细胞的IC50在 10-40 I-tg／ml之间。进一步的研究表明，该蛋白聚糖(PG)引起的细胞毒性机理 在于：PG减少S180细胞的胞内活性氧含量(I的S)，将细胞周期阻滞在G0／G1期， 随后发生细胞凋亡，引起细胞膜结构完整性的变化，最终导致细胞的死亡。利用 建立的S180荷瘤小鼠模型，通过三种给药方式(腹腔注射给药，静脉注射给药和 瘤内注射给药)连续给药10天，观察20天内，蛋白聚糖对小鼠体重、瘤体积的 影响，20天后处死小鼠，取出瘤块，计算抑瘤率，结果表明3种给药方式都具 Ⅱ 有显著的抑Nsl80肉瘤生长的作用，结合实验小鼠的体重抑制情况，静脉注射 0．4mgkg1day1被推荐为以后研究的手段。 本研究建立了番红花球茎愈伤组织诱导体系，确定其最佳的培养条件为：球 茎芽点周围表皮为外植体，在MS+5．06-BA+8．0NAA+30 mg／L mg／L g／L蔗糖的 培养基，暗处，22±2℃培养。对继代培养的方案进行筛选，获得了积累蛋白聚 糖最多的培养条件：2．5 2,4-D+0．56-BA+30 lux，12h／12h mg／L mg／L g／L蔗糖3000 光照下培养。利用细胞体外毒性证明了所提取得到的蛋白聚糖与球茎中的提取获 得的相一致，具有体外细胞毒性作用。 关键词：番红花球茎：蛋白聚糖；抗肿瘤；细胞凋亡：细胞周；活性氧；愈伤组 织 Ⅲ Abstract Cancercontinuesto the causeof intheworldand representlargest mortality claimsover6millionliveseach isstill an year．Chemotherapeuticsplayingimportant iIl role thetreatmentfor were of malignanttumor．Although，theremajorities notbe search anti-tumorin