文冠果悬浮体系的建立和原生质体的分离.pdfVIP

摘 要 文冠果（Xanthoceras sorbifolia Bunge ）为无患子科（Sapindeceae）文冠果属植物， 是我国特有的珍稀木本油料和药用植物。本研究以文冠果成熟种胚为材料，诱导胚性愈 伤组织，建立了稳定的悬浮细胞体系。并以文冠果种胚苗叶片为材料，通过对分离原生 质体多重影响因子的筛选，建立了良好的原生质体分离体系。获得试验结果如下： 以文冠果成熟种胚为试验材料，筛选诱导愈伤组织的最适培养条件、继代愈伤组织 的最适培养条件；并对白色、透明和黄色愈伤组织这三种愈伤的抗氧化酶活性和蛋白质 含量进行研究，结果表明：诱导愈伤组织的最适培养条件：培养基为B + 2 mg / L 2,4-D 5 + 20 g/L 蔗糖 ＋ 5.5 g/L 琼脂（pH5.8 ），培养温度为（25 ± 2 ）℃，暗培养。继代愈伤 组织的最适培养条件：培养基为B + 1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L 6-BA + 20 g/L 蔗糖 + 5.5 5 g/L 琼脂（pH5.8 ），培养温度同上，弱光培养。三种愈伤组织中白色和黄色愈伤组织的 POD 活性极显著高于透明愈伤组织；白色和透明愈伤组织的CAT 活性极显著高于黄色 愈伤组织，白色愈伤的CAT 活性显著高于透明愈伤；白色愈伤组织的SOD 活性极显著 高于透明和黄色愈伤组织；黄色愈伤组织的可溶性蛋白含量极显著高于白色和透明愈伤 组织，白色愈伤的可溶性蛋白含量极显著高于透明愈伤。说明三种抗氧化酶活性和可溶 性蛋白质含量与愈伤组织的发育密切相关。 以继代培养获得的文冠果胚性愈伤组织为材料，进行悬浮培养细胞系的建立及细胞 生长特性的研究，结果表明：文冠果细胞悬浮培养的初始接种量以2 g / 40 mL 液体培养 基 / 100 mL 的三角瓶为宜，最适激素浓度以2,4-D 、6-BA、NAA 均为0.5 mg/L 为宜， 继代周期为18 d，细胞活力在接种第3 d 达到最大，细胞分裂指数在接种第10 d 达到最 大，鲜重增加量在第14 d 达到最大。 以文冠果种胚苗叶片为材料，研究了甘露醇、纤维素酶、果胶酶及酶解时间对其原 生质体分离的影响。结果表明：最佳酶液组成为：纤维素酶1.2﹪＋果胶酶0.8 ﹪＋10﹪ 甘露醇＋2 ﹪MES ＋ PBS 溶液，摇床转速为40 rpm ，温度（25 ± 2 ）℃，酶解时间4 h ， 可高效分离出有活力的原生质体。 以文冠果稳定的悬浮系细胞为材料，初步研究了酶解时间、酶液浓度对其原生质体 分离的影响。结果表明：酶液组成为：纤维素酶 2.5 ﹪＋果胶酶1.5﹪＋10﹪甘露醇＋2 ﹪MES ＋ PBS 溶液，摇床转速为40 rpm ，温度（25 ± 2 ）℃，酶解时间12 h，可分离 出大量有活力的原生质体。 关键词：文冠果；愈伤组织；悬浮体系；生长特性；原生质体 Establishment of Suspension Culture and Preparation of Protoplasts in Xanthoceras sorbifolia Bunge Author: LIU Lei Major: botany Supervisor: GU Yu-hong Abstract Xanthoceras sorbifolia Bunge is a plant belonged to Sapindaceae, which is one of the peculiar woody fuel and medicinal plants in China. This study dealt with