第七章单倍体培养精要.ppt

第七章 单倍体细胞培养 单倍体植物：体细胞中只具有配子染色体数的个体，其基因型是半合子（Merozygote)状态的，如使其染色体数加倍，便可直接成为纯合的二倍体（双倍体）。 单倍体培养：花药培养，小孢子培养和未受精子房及卵细胞培养 主要内容 单倍体种类 单倍体的起源和遗传行为 单倍体的减数分裂 单倍体的应用价值 花药培养 花粉培养 雌配子诱导单倍体 单倍体细胞培养与植物育种 1单倍体种类 一倍单倍体 多倍单倍体 2单倍体的起源和遗传行为 单倍体的起源 自发产生 诱发产生 诱发单倍体的方法 种间和属间杂交 物理照射和化学诱变 双生苗的筛选 花药和花粉培养 3单倍体的减数分裂 中期Ⅰ纺锤丝高度紊乱，后期Ⅰ染色体随机地分向两极 4单倍体的应用价值 在植物育种中使后代迅速纯合：用于杂交制种 提高选择效率：比常规育种提高1倍效率 排除杂种优势对后代选择的干扰：选择变异可代表真实变异情况。 遗传研究的良好实验材料体系：对数量遗传研究有很大用途 突变体的筛选：隐性基因性状可表现出来 消除致死基因：致死基因一表现出来就消除 选育新型自交系：获得纯合自交系 遗传转化的受体材料：获得的转基因材料可很快加倍纯合。 5花药培养 我国花药培养起步晚，进展快，成果卓著。我国研制的N6培养基成为国际通用培养基。 花药培养的技术问题有很多有待解决,但单倍体育种可缩短育种周期 花药培养 5.1花药培养的程序和方法 材料的选择 供体植株的基因型：春小麦比冬小麦容易些，粳稻比籼稻容易培养，花药培养力从高到低：糯稻＞粳稻＞粳籼杂种＞籼稻　　　花粉植株诱导力是受材料孢子体（药壁）基因型的控制 供体植株的生理状态：诱导力随植株年龄下降　　选用正常生长季节的早期雄花或主穗及在最适宜温度条件下发育的花药为材料　　田间生长的材料比温室材料好 花粉发育时期：花粉胚性和非胚性 5.2预处理 低温法 在冰箱内冷藏 可降低花药呼吸强度，减少物质消耗，延长花药寿命，减少花粉的退化，使大多数花粉存活，利于小孢子从配子体发育转向孢子体发育 其他方法 乙烯利喷射植株，离心花蕾 低剂量γ射线照射 5.3材料的消毒和接种 去掉培养瓶上的封口膜 收集花药 接种花药到培养基上 接种完后，封口，包扎，写上记号 5.4诱导培养 要点 诱导花粉去分化，启动花粉孢子体发育 抑制花药体细胞组织（如药隔、药壁）的生长 常用培养基：MS(1962)、Nitsch(1969)、Miller(1963)、H(1967)、B5(1968)、N6(1975)等 激素添加和配比影响花粉发育途径 蔗糖浓度通常很高，较高的浓度可使小孢子存活时间长 pH值有一定影响 有机附加物有重要作用:谷氨酰胺 5.5培养操作技术 暗培养后再光培养 评价花药培养体系的好坏指标：压片或切片观察，计算启动分裂的小孢子/总小孢子，计算愈伤组织块数（胚数、植株数）/花药（花蕾），一定时间内计算尚有活力的小孢子数/总小孢子数 5.6影响花药培养的因素 供体植株的生长条件：需控光控温 供体植株的年龄：多数情况下幼年植株优于老年，而甘蓝型油菜相反。 花粉发育时期：单核期或双核早期 花蕾和花药的预处理：低温处理、高温处理、激素处理、高低渗处理等 供体植株的基因型：胚形成能力、愈伤组织诱导率、绿苗再生率等有差异 培养基：激素种类和浓度、氮素使用量、有机物质、蔗糖浓度、pH值高低、乙烯等 培养条件：温度、光照、培养密度等 活性炭：调节内源和外源生长物质的水平 5.7分化培养 愈伤组织产生10-15天，可将其转移到分化培养基 分化培养基要去掉2，4-D，加入一定量的Kt或NAA或IAA，蔗糖浓度降至2-3％ 分化芽需1-2周 分化能力和愈伤组织的年龄有关 花粉苗长出根后，可移植 5.8花药培养中的雄核发育途径和植株分化 雄核发育花粉：花药培养中小孢子偏离配子体发育途径的花粉 雄核发育（小孢子发育）的主要途径（四条途径） 小孢子途径（B途径） 营养细胞发育（A途径） 生殖细胞发育（A-G途径） 由生殖细胞和营养细胞同时发育（C途径） 5.9花粉偏离正常发育途径的机理 花药壁的作用 药壁组织对诱导形成愈伤组织、胚状体乃至绿苗的分化起一定的作用 花粉的二型性 在一个植物种或品种的花粉群体中，存在正常的和非正常的两种花粉的现象称为花粉的二型性 异常花粉发育的途径是A、B途径 二核型花粉具雄核发育预成性 5.10花粉植株的分化产生 胚状体发育途径（四种不同的起源） 小孢子发生的全部细胞参与胚状体形成 小孢子发生的细胞由个别细胞发育形成胚状体，这种胚性细胞具双极性 小孢子发生细胞发育为愈伤组织，再发生胚状体 小孢子发生细胞先游离为单细胞，再形成愈伤组织发生胚状体 愈伤组织再分化途径 5.11逆境处理对小孢子胚胎发生的诱导作用 热激处理 有效诱导孤雄生殖，产生热