raav2hf无创途径治疗血友病b的临床研究.pdf

摘要 血友病B是一种FIX基因缺陷所致的出血性疾病。虽然通过肌肉注 射、门静脉或肝动脉灌注重组腺相关病毒载体等方法，在动物模型上 取得长期纠正出血症状的疗效，但是以上给药方式均为有创性。而以 肠上皮细胞为靶细胞，通过灌肠给药，则可避免有创性。本实验室通 过结肠灌注rAAV2／hFⅨ载体对血友病BzJ,鼠进行基因治疗实验，已经 建立了无创给药的临床试验基础。 为了检测通过结肠灌注rAAy2／hFⅨ载体治疗血友病B的有效性和 安全性，我们选择了两位血友病B患者，在纤维结肠镜引导下结肠灌 注rAAv2／}lFⅨ载体，观察其临床症状和体征变化，留取患者全血、血 浆、唾液、尿液。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测患者血浆和 粪便中抗从V2抗体以及FIX抗原；凝血活性一期法检测FⅨ活性；改进 技术检测rAAV2／hFⅨ载体在体液中的分布情况。 两例患者结肠灌注i}l}量分别为3×101Zvg／kg，8X101zVg／kg，在灌 注后的一个月中，均未出现胃肠道及全身不适症状和异常体征。血浆 p ll 中的FⅨ抗原最高浓度分别达6g／ml和4．69g／ml，其活性分别为 2．27％和2．63％，可维持一周左右。结肠灌注r从V2／hFⅨ载体后，两 位患者体内均未检测到抗FIX抗体升高。在尿液、唾液、血液中均未 检测到rAAv2／hFⅨ载体基因。但是抗AAv2抗体相对浓度随灌注剂量增 加而增加，在接受高剂量灌注的患者体内可以检测到高浓度的抗AAv2 抗体，在24天达到高峰，其相对浓度为治疗前的39．5倍。 综上所述，结肠灌注途径基因治疗血友病B在上述剂量下是安全 的，患者体内可表达具有凝血活性的FIX。 关键词重组腺相关病毒2／人凝血因子Ⅸ，血友病B，基因治疗，无创 途径 ABSTRACT a disordercausedmutationsinthe B，is Hemophiliableeding bY blood factor oneofthemost IX,is geneencodingcoagulation extensively studieddiseasemodels for correctionofthe genetherapy．Long-term disorderhasbeen inthe achievedanimalmodelsof bleeding hemophilia B adenc-associated intramuscular using viral出拍修vectorsthrough or veinadministrationandSOon．But injection,thehepaticartery portal allofthese aretraumatic。Delivertherecombinant approaches viral adeno-associatedvector thecolonic lumen,