rna干扰cxr4和cxcr7对子宫内膜癌细胞生物学功能的影响.pdf

RNA 干扰 CXCR4 和 CXCR7 对子宫内膜癌细胞生物学功能的影响 摘要 目的：本研究通过利用 siRNA（small interference RNA）沉默趋化因子受体CXCR4 和 CXCR7 基因的表达，探讨其对子宫内膜癌细胞株生物学功能的影响。 方法：①通过半定量RT-PCR 及 western blotting 检测人子宫内膜癌细胞株中趋 化因子受体 CXCR4/CXCR7 及其配体 CXCL12 的表达； ②针对人 CXCR4 和 CXCR7 基因设计合成靶向特异性 siRNA （小分子干扰 TM RNA ），利用 Lipofectamine 2000 脂质体转染剂瞬时转染至人子宫内膜癌 Ishikawa 和 HEC-1-A 细胞株，应用 RT-PCR 及 western blotting 验证干扰效果； ③通过 CCK-8、流式细胞术和 Transwell 法分别检测 CXCR4 和 CXCR7 基因 沉默对 Ishikawa 和 HEC-1-A 增殖、细胞周期和侵袭能力的影响。 结果：①Ishikawa 和 HEC-1-A 细胞株均见 CXCR4、CXCR7 和 CXCL12 mRNA 和蛋白 的表达； ②将研究合成的 CXCR4-siRNA、CXCR7-siRNA及CXCR4-siRNA/CXCR7-siRNA 转染至 Ishikawa 和 HEC-1-A 细胞株后，均可分别并成功干扰 CXCR4、CXCR7、 CXCR4/CXCR7 基因或蛋白的表达，通过半定量 RT-PCR 和 western blotting 检测 分析发现干扰后细胞 mRNA 和蛋白的表达量明显下调； ③在 CCK-8、Transwell 及流式细胞术实验中，CXCR4 和 CXCR7 的单独沉 默和联合沉默均可导致 Ishikawa 和 HEC-1-A 细胞株增殖能力和趋化侵袭能力明 显降低，同时引发 Ishikawa 和 HEC-1-A 细胞周期出现 S 期阻滞。 结论：通过应用 siRNA 靶向沉默 CXCR4 和 CXCR7 后，子宫内膜癌细胞株 Ishikawa 和 HEC-1-A 的增殖和侵袭能力均降低，并在细胞周期中出现 S 期阻滞。结果提示 趋化因子受体 CXCR4 和 CXCR7 在 Ishikawa 和 HEC-1-A 细胞的增殖和侵袭行为中 发挥重要作用，CXCR4 和 CXCR7 途径的抑制有望成为子宫内膜癌治疗的新靶点。 硕士研究生 龙萍（妇产科学） 指导教师 黄煜 副教授 关键词:子宫内膜癌；CXCR4；CXCR7；CXCL12；基因沉默； - 2 - 万方数据 RNA interference CXCR4 and CXCR7 influence the biological behavior of endometrial carcinoma cell lines Abstract Objective To explore the effects of chemokine receptor CXCR4 and/or CXCR7 interference on the biological characteristics of endometrial carcinoma cell line Ishikawa and HEC-1-A. Methods 1. Chemokine recepto