云南三种不同气类型蛙类热驯化中hsp70表达差异的研究.pdfVIP

摘要 热激蛋白70是热休克蛋白家族中最重要的一类家族成员，在应激条件下大 量表达。它具有“分子伴侣”、细胞保护、抗凋亡以及肿瘤免疫治疗等独特复杂 的生物学功能，因此，它的研究已成为生命科学领域研究的热点之一。目前热激 蛋白70的研究所涉及的物种广泛，而对于两栖动物，尤其是有关不同气候类型 两栖动物HSP70的研究比较少。全球性的两栖动物种群数量锐减已经得到科 学界证实和重视，并且认为全球气候变暖是导致两栖动物锐减其中重要原 因之一。两栖动物的特殊生物特性决定它们与环境之间的关系是最为密切的， 而这种密切的关系可能与依赖热激蛋白70来实现有关，本文主要以采自昆明地 区的黑斑蛙，西双版纳地区泽蛙，丽江地区双团棘胸蛙为实验动物。通过不同热 驯化蛙类器官中的HSP70的Westernblotting法测分析，研究不同器官的HSP70 在时间和温度上的诱导表达变化以及HSP70作为生物标志物的可行性。探讨三个 不同类型蛙类在相同驯化条件中热激蛋白70表达变化。初步了解气候变暖对三 种不同气候类型蛙类影响。 本研究方法如下：实验动物随机分组a、正常对照组；b、热驯化条件组， 5℃，20℃，25℃，30℃， 分为3个时间点(3h、6h、9h)和5个温度梯度(1 35℃)。应用Westernblotting法测定蛙类肝脏、心脏、脑、皮肤、肌肉、脾 脏器官HSP70的含量。 实验一．昆明地区黑斑蛙在没有热驯化条件下，各器官的HSP70表达量多少 排列：肝脏皮肤脑心脏肌肉脾脏。结合实验的结果，选择了肝脏、皮肤、 脑、心脏的HSP70表达量作为持续热应激的检测对象。 实验二．三个地区蛙类各器官的HSP70表达差异表明，不同组织中HSP70有 显著的诱导表达，表现出一定程度的波动性和规律性。 丽江地区双团棘胸蛙驯化后结果显示，高温(35℃)对肝脏、脑、皮肤 对肝脏、心脏、脑、皮肤的诱导表达与25℃对照组相比也有显著作用(p0．01)。 不同组织表达高峰在不同温度的不同驯化时间，其中肝脏和心脏的HSP70在 35℃9h中有最高表达，分别是25℃驯化平均值的2．94倍和1．26倍；脑组织 在15℃9h中有最高表达，是25℃驯化平均值的1．99倍；皮肤组织在30℃3h 中有最高表达，是25℃驯化平均值的1．42倍。 西双版纳泽蛙驯化后实验数据的t检验分析结果表明，高温(35℃)肝 脏、心脏诱导表达有显著作用(pO．01)。低温(15℃)对肝脏、心脏、脑、 皮肤诱导表达也有显著作用(p0．01)。不同组织表达高峰在不同温度的不同 驯化时间，其中肝脏、脑和皮肤组织的HSPTO在15℃9h中有最高表达，分别 最高表达，是25℃驯化平均值的1．85倍。 昆明地区黑斑蛙驯化后实验数据的t检验分析结果表明，高温(35℃) 对脑、皮肤在不同时间诱导表达有显著作用(pO．01)。低温(15℃)对肝 脏、心脏、脑、皮肤不同时间诱导表达有显著作用(p0．01)。不同组织表达 高峰在不同温度的不同驯化时间，其中肝脏在15℃6h中有最高表达，是25。C 驯化平均值的2．88倍；心脏组织在15℃3h中有最高表达，是25。C驯化平均 驯化平均值的1．41倍和2．15。 综上所述，Western 性，该表达方式说明HSPTO在蛙类热损伤保护中起着重要的作用。另外在丽江地 区双团棘胸蛙在35。C的驯化过程中，出现大量死亡的个体，并且死亡的大多 数是小个体，并且实验结果表明该地区的蛙类对高温抵抗力最低。而在版纳地区 中的蛙类低温的驯化后的HSP70的表达比高温驯化后高，对高温的抵抗力最强， 提示该地区的蛙类在长期的进化中已适应高温的生活环境。昆明地区的蛙类 对过高过低温度敏感性最小，与该地区的蛙类是广温性蛙类有关。推测如 果全球气候的急剧变化，可能对低温狭温性的蛙类造成一定的影响。 关键词蛙HSP70热驯化Western-blotting适应性 Abstract Heatshock oneofthemost members protein70kDa(HSP70)isimportantproteinsamong of functionsas are molecular the