中华绒螯蟹血细及部分体液免疫因子的初步研究.pdfVIP

中华绒螯蟹血细胞及部分体液免疫因子的初步研究 摘要 本论文对中华绒螯蟹血淋巴凝固与血细胞的关系，血细胞总数，各种 类型血细胞所占百分比，长、短轴的大小及其部分体液免疫因子进行了初 步研究，不仅丰富了中华绒螯蟹血液学与免疫学的基础理论，而且还为中 华绒螫蟹的疾病诊断提供了部分m液学和免疫学指标。 3 i 中华绒螯蟹循环血液中血细胞总数为13357个／film7196个／舢‘， um±1．1u 其中大颗粒细胞所占比例49．8％±7．5％，其长轴16．6 Ill，短轴 10．2“m±0．6um：大小颗粒中间型细胞所占比例20．6％±5．3％，其长轴 13．1 tl u珈±0．5 u皿±1．2m，短轴8．4 p珈；小颗粒细胞所占比例29．3％± um±1．2u um±0．4u 4．8％，其长轴12．4 m，短轴8．1 m；无颗粒细胞所占 um±1．3u um±1．1um。血 比例0．2％±0．2％，其长轴11．3 m，短轴8．9 细胞和小颗粒细胞形态结构发生变化，细胞以及其胞核立即膨大，核质比 迅速增大，细胞膜破损崩解，胞浆溢出，血液完全凝固后这些细胞形态结 构继续变化，主要表现为胞质内线粒体、内质网等细胞器扩张溶解消失， 小颗粒细胞中的小颗粒内含物渗出或溢出，颗粒空泡化或崩解，细胞核固 缩等变化过程。而大小颗粒中间型细胞和大颗粒细胞形态结构的变化明显 慢于前两种血细胞，在细胞离体后5min时，细胞和细胞核才开始出现膨大， 并逐渐出现细胞膜、线粒体、内质网溶解消失，颗粒空泡化或崩解以及细 胞核固缩等形态结构的变化。结果表明，血液凝固依赖于无颗粒细胞和小 颗粒细胞在形态结构变化过程中释放的胞浆物质。 中华绒螯蟹具有细胞免疫功能和体液免疫因子，作为体液免疫因子之 一的血清凝集素在中华绒螯蟹由猜中天然存在，它与狗、小白鼠、鸡、鸭、 1 鸽的血红细胞产生不同程度的凝集反应，但对鲫鱼的血红细胞无凝集作用。 后的血清变性为乳白色果胨状；凝集素的pH适应范围较广，最适pH为5～ 8；凝集素的凝集活性不被葡萄糖、蔗糖、D一棉子糖、D一鼠李糖、D一果糖、 L一阿拉伯糖、D一半乳糖、L一山梨糖、纤维二糖、麦芽糖所抑制；对EDTA二： 二钠完全抑制血清凝集素的凝集活性；外源性的ca”、Mg针对其凝集活性 无影响；盐度在48以下凝集活性稳定，达60时其凝集活性明显下降。交 叉吸附试验表明中华绒螯蟹血清中至少存在2种不同的凝集素。 中华绒螯蟹的血细胞在离体后非常容易发生自溶，从而导致血淋巴发生 凝固，在前面的研究中我们已经证实了血淋巴凝固依赖于无颗粒细胞和小 颗粒细胞在形态结构变化过程中释放的胞浆物质。本研究选用草酸钾等十 种抗凝剂对中华绒螯蟹血淋巴进行抗凝试验。结果表明，1．67倍抗凝剂八 EDTA二 mmo[／1 钠Na3C。H。O，·2H：0、43．33mmol／l柠檬酸c6H。07·叱O、16．67 钠，PH5．5)为中华绒螯接血淋巴一种比较理想的抗凝剂，在抗凝剂与血 淋巴体积比为2：5时，这种抗凝剂不仅能有效延长中华绒螫蟹血淋巴凝集 时间达69．8mil3以上，而且还能较好的维持中华绒螯蟹匝细胞形态的完整 性。本研究的结果对开展中华绒螯蟹血淋巴中PO的定位、血细胞的培养等 研究将产生积极的意义。 甲壳动物的体液免疫因子包括酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD) 和溶菌酶(LSZ)等，本研究对中华绒螯蟹