三氧化二砷对前腺癌du-145细胞rassf1a基因的去甲基化作用.pdf

摘要 的去甲基化作用 研究生：倪渐风 导师：王留兴教授 郑州大学第一附属医院肿瘤科 河南郑州450052 摘 要 背景： Cancer 前列腺癌(ProstatePCa)是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之 一，在欧美国家，其发病率在男性所有恶性肿瘤中排名第一，死亡率位居第二。 我国前列腺癌发病率近年来也迅速增长，且发现时大多已处于中晚期，因此对 于晚期前列腺癌的治疗是临床医师面临的巨大挑战。 domain 1八)属于Ras相关结构域家族，是新 RASSFlA(Rasassciationfamily 近发现的一个位于人染色体3p21．3上的抑癌基因111，编码一组RAS效应蛋白， RASSFlA的功能分析显示该蛋白在凋亡的信号传导、微管稳定性和细胞周期循 环方面均有潜在的作用121，在诱导细胞凋亡及多种恶性肿瘤的发生的过程中都 发挥作用。大量研究表明其在正常组织中可以表达，而在多种实体肿瘤中却出 现较高频率的表达缺失，其表达缺失的机制可能有：RASSFlA基因启动子甲基 化、纯合子缺失和杂合子缺失，其中以启动子甲基化为主111。所以通过对其去 甲基化作用可以使该基因重新表达。 目前所应用的甲基化抑制剂中比较常见的是5．氮杂脱氧胞苷(5．Aza．CdR) 等胞苷类似物，但是因其细胞毒性和致突变效应均较强的，故限制了它的临床 应用【31。最近几年的大量实验研究表明三氧化二砷(As203)用于治疗复发和难 治性的急性粒细胞自血病，缓解率高达72％以上，As203治疗实体瘤的疗效也 处于临床研究中【引。这些主要是关于对As203的诱导细胞凋亡和细胞分化的作 用的研究，而对于其去甲基化作用的研究却相对较少。 ’ 摘要 本实验通过研究不同浓度的舡203对激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞株 进行药物诱导后，是否可以使其抑癌基因中的RASSFlA基因启动子区CpG岛去 甲基化而诱导其重新表达，达到抑制细胞增殖的作用。从而为激素非依赖性前 列腺癌的治疗提供新的治疗药物。 目的： 研究三氧化二砷(As203)对激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞株的增殖 抑制作用及对RASSFlA基因去甲基化和蛋白表达的影响，初步探索AS203对 l认SSFlA基因可能的作用机制。 材料与方法t 1、选用激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞珠常规培养，生长至对数期时，稀 6．0、12．0、20．0 h。 h)对激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞株 舡203不同作用时间(24，48，72 增殖抑制作用，并绘制生长抑制曲线。 h后，RASSFlA基因的 舡203作用激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞株72 甲基化情况。 4、应用Western 的作用激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞株72h后，RASSFlA基因蛋白 的重新表达情况。 5、应用SPSSl7．0统计软件处理实验数据，统计学差异的比较采用t检验、非 参数检验及方差分析，检验水准a=0．05。 结果： l、舡203可以抑制激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞的增殖，在一定范围内 随着药物浓度的增高，对前列腺癌增殖的抑制作用越明显，具有剂量依赖 具有时间依赖性。 2、 MSP显示在未应用As203处理组，激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞的 RASSFlA基因呈甲基化状态，而经AS203作用72h后，MSP显示RASSFlA Ⅱ 摘 要 基因甲基化状态逆转。 3、 Western