乙酰肝素酶和pdocin在糖尿病肾病大鼠蛋白尿发生中的作用.pdf

郑州大学2007届硕士研究生论文(摘要) 乙酰肝素酶和podocin在糖尿病肾病大鼠蛋白屎发生中的作用 乙酰肝素酶和podocin在糖尿病肾病大鼠蛋白尿发生中的作用 研究生 王玉华 导师 刘章锁教授 唐琳副教授 郑州大学第一附属医院肾内科 河南郑州450052 摘 要 背景与目的 糖尿病肾病(diabeticnephropathy，D№是糖尿病常见微血管并发症之一，也是 renal 导致终末期肾脏疾病(endstage disease，ESRD)的主要原因。微量白蛋白尿是 DN早期临床诊断指标，而大量蛋白尿的出现则预示着肾小球病变不可逆转，DN 患者在短期内将进入ESRD。因此，深入研究蛋白尿发生机制为临床防治DN提供 新的线索有着重要的意义。肾小球滤过屏障的完整性决定着其对蛋白质的选择通透 性，肾小球基底膜中的硫酸乙酰肝素(heparan sulfate，HS)对滤过膜维持电荷屏障起 球基底膜HS侧链，在蛋白尿发生机制中发挥着重要作用。同样，podocin作为足细 胞裂孔隔膜(slitdiaphragm，SD)的重要组分参与构成滤过膜机械屏障，近期研究表 明其与肾病综合征等多种肾脏疾病蛋白尿的发生密切相关。而二者在DN蛋白尿发 生中的作用国内、外报道甚少。因此，本研究旨在检测糖尿病肾病大鼠肾组织HPA 和podocin的表达情况并分析其与蛋白尿发生发展的相关性，以探讨糖尿病肾病蛋 白尿发生的分子机制。 方法 1、建立糖尿病肾病大鼠动物模型。体重180．2009健康SD雄性大鼠26只，随机 每组各10只。NC组腹腔注射等量的枸橼酸缓冲液作为对照。 2、标本的收集。分别于造模后6W和12W用金属代谢笼收集大鼠24／],时尿量； 郑州大学2007届硕士研究生论文(摘要) 乙酰肝素酶和!∞doein在糖屎病肾病太鼠蛋白尿发生中的作用 留取血样，送检24h尿蛋白定量和生化指标。处死，迅速取出双肾，左肾称重后液氮 冻存备用；取右肾用10％甲醛固定留做光镜及免疫组化。 3、采用免疫组织化学和逆转录聚合酶联反应(reversetranscriptionPCR)技术分 别从蛋白和基因水平检测各组大鼠肾组织HP√谛podocin的表达变化。 结果 1、DN两组的相对肾重、24h尿量及24h尿蛋白定量与正常对照组相比差异 具有统计学意义(尸如．05)。 mRNA表达半 PO．ooD。HPA 组87．59+10．22，三组之间具有统计学差异(F=11．171 差异具有统计学意义(F=11．196P0．001)。HPA蛋白和基因表达与大鼠尿蛋白定量 P0．001：r=O．793 之间均存在正相关趋势(r=0．783 P0．001)。 55．27+7．46，三组之间有统计学差异(F=11．654 定量之间存在负相关趋势(，：一0．833 相关性(r=0．320 P0．05)。 4、HPA蛋白和podocin蛋白表达之间存在负相关趋势(r=_0．653P0．05)，而 二者基因表达之间无相关性(r=0．265 P0．05)。 小结 1、HPA表达增高与DN大鼠蛋白尿的发生有关。 mRNA水平升 2、podocin蛋白表达减少促使DN大鼠蛋白尿的发生。podocin 高，与其蛋白表达不相一致，推测此现象是DN早期足细胞对podocin蛋白表达下 调在mRNA水平的代偿性反应。 3、HPA和podocin在DN蛋白尿的