脑源性神经营养子基因修饰骨髓间充质干细胞治疗坐骨神经损伤.pdfVIP

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间充质干细胞治疗坐骨神经损伤 论文摘要 第一部分BDNF基因修饰的大鼠骨髓间质干细胞构建及鉴定 目 的 将携带大鼠BDNF基因之慢病毒载体感染大鼠骨髓间质干细胞(rat stem mesenchymal (BDNF．rMSCs)。 取新鲜骨髓，体外分离rMSCs并培养、鉴定。浓缩病毒测定滴度后感染2--4代 rMSCs，荧光激发及细胞免疫组织化学以鉴定。(本方法是按福建医科大学附一 医院神研所张志坚课题组关于BDNF基因修饰的大鼠骨髓间质干细胞构建及鉴 定的方法和步骤进行。) 结果三质粒共转染293T细胞后荧光激发可见大量绿色荧光。收集、浓缩病 入。病毒感染rMSCs后荧光激发可见绿色荧光，细胞免疫组织化学检测有BDNF 蛋白表达。 白，为下一步BDNF．rMSCs移植治疗坐骨神经损伤奠定了基础。 关键词 骨髓间质干细胞慢病毒载体BDNF 5 第二部分BDNF．rMSCs基因工程干细胞对坐骨神经损伤的治疗作用 目 的 观察植入脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间充质干细胞后坐骨神 经损伤大鼠神经纤维的再生及运动功能的恢复情况。 方法 180只成年F344大鼠，采用钳夹法制作成右坐骨神经损伤模型，随机分 为磷酸盐缓冲液组(PBS组)，骨髓间质干细胞组(空载体．rMSCs组)，脑源性 神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞组(BDNF．rMSCs组)。各组在损伤处分别 注射磷酸盐缓冲液2pL，骨髓间质干细胞混悬液2pL和脑源性神经营养因子基 因修饰骨髓间质干细胞混悬液2laL。在移植术后2，4周，通过辣根过氧化物酶 示踪观察损伤侧L4．5脊髓前角存活的神经细胞数目，通过测量坐骨神经功能指 数值观察大鼠损伤侧肢体运动功能恢复情况，同时应用荧光激发及免疫组化技术 检测骨髓间质干细胞存活和脑源性神经营养因子表达情况。 载体一rMSCs组，并且神经功能恢复也比这两组好。空载体．rMSCs组， BDNF．rMSCs组可观察到神经损伤处有较多的骨髓间质干细胞存活，并且 BDNF．rMSCs组脑源性神经营养因子表达明显比空载体．rMSCs组多。 结论：脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞移植对周围神经损伤后神经 功能恢复有促进作用。 关键词：脑源性神经营养因子：骨髓间质干细胞；周围神经损伤：辣根过氧化物 酶 6 The oflentiviralvectormediatedBDNF therapeuticefficacy gene-modified in nerve rMSCssciatic injury Postgraduate：ZhengMing-hui Advisors：Prof．Zhangzhijian ABSTRACT PartOne Lentiviral theBDNFinfectsthe vector rat Objectives carrying gene mesenchymal stem BDNF rMSCs． cells(rMSCs)to get gene—modified Thelentiviral Methods the plasmidPNL-BDNF-IRES2-EGFR、舫tll packagin