舒芬太尼对人脐树突状细胞免疫功能的影响.pdfVIP

中文摘要 舒芬太尼对人脐血树突状细胞免疫功能的影响 摘 要 目的：树突状细胞是与机体免疫功能密切相关的抗原提 呈细胞，是目前已知抗原提呈能力最强的专职抗原提呈细 胞；肿瘤患者免疫功能普遍低下，各种麻醉方法和药物对肿 瘤患者免疫功能的影响也不容忽视。本研究排除手术创伤、 应激反应等影响因素，以脐血单个核细胞为来源，体外定向 培养树突状细胞，从细胞水平探讨舒芬太尼对树突状细胞增 殖与免疫功能的影响。 方法：无菌条件下采集健康孕妇正常胎儿脐带血70ml 左右，用肝素抗凝。在超净工作台下用生理盐水：脐带血为 1：1的比例稀释后，再按照稀释血：淋巴细胞分离液之比为 2：l的比例缓缓加到淋巴细胞分离液上层，密度梯度离心法 获得脐血单个核细胞(CBMC)，将细胞用生理盐水清洗3次 后弃上清加入无血清培养基计数单个核细胞。调整细胞数量 5％C02培养箱中孵育2h，移去悬浮细胞，保留贴壁细胞， 调整细胞数量为l×106／ml。然后分组进行培养：阴性对照 DC(．、)组：只加入重组人类粒细胞集落刺激因子 0ng／ml培养 中文摘要 培养10d。培养过程中在倒置显微镜下观察细胞生长情况及 形态学变化。培养到第10d时收集细胞以流式细胞分析仪分 要组织相容性复合体MHC．11分子之一、)分子的表达，收集培 养到第10d的各组细胞培养上清用双抗体夹心免疫(ELISA) 法测定其分泌IL一12的水平。取健康志愿者外周血20ml， 同上述方法制备外周血单个核细胞(PBMC)，加入含有10％ 浮细胞作为同种异体混合淋巴细胞，调整细胞数量为2．O×106 检测DCs刺激混合淋巴细胞的增殖能力。 结果： 1舒芬太尼对DCs培养形态的影响：三组细胞培养24h 后在倒置显微镜下观察各组DCs可见少量悬浮细胞，但大部 分仍贴壁生长并聚集成簇；培养48h后形态不规则悬浮细胞 增多。与阴性对照组相比，阳性对照组和药物组细胞培养5d 后其形态变为不规则形，细胞周围出现细小的树突样伪足； 培养10d后细胞体积增大可见典型树突样突起，但与阳性对 照组相比，药物组细胞随舒芬太尼浓度增加树突状伪足逐渐 不明显。 2舒芬太尼对DCs免疫表型的影响：和阴性对照组比 药物组表达低于阳性对照组(KO．05)，且呈不典型的剂量依 中文摘要 赖性下降趋势。 3舒芬太尼对DCs分泌细胞因子IL．12的影响：和阴 性对照组比较，阳性对照组和药物组的DCs分泌的IL一12 28．2±4．9；药物组各浓度之间比较差异无统计学意义(尸 0．05)。 。 4经舒芬太尼刺激后的树突状细胞对刺激混合淋巴细 胞增殖反应的影响：成熟DCs对混合淋巴细胞具有很强的刺 激增殖作用，而未成熟的DCs刺激T细胞增殖作用较弱，阴 性对照组细胞处于不成熟阶段对混合淋巴细胞的刺激能力 较弱。药物组和阳性对照组细胞能促进同种混合淋巴细胞增 殖但随药物浓度增加刺激能力逐渐下降且低于阳性对照组(尸 O．05)。 结论：脐血来源的单个核细胞可在舒芬太尼的刺激下诱 导为成熟的树突状细胞，且舒芬太尼对树突状细胞的成熟和 免疫功能的影响具有不典型的剂量依赖性下降趋势，但IL．12 的分泌与剂量无关。 关键词：舒芬太尼；麻醉；免疫功能；树突状细胞；脐 血单个核细胞 英文摘要 of Effectssurentanilontheimmunefunctionof from dendriticcells umbilicalcordblood ABSTRACT dendritic cellhasacloselinkwiththe Objective：The i