次级代谢产物异源表达载体及Streptomyces+sp+81基因组文库构建.pdfVIP

摘要 摘要 异源表达生理活性物质的生物合成基因簇是药物研发领域的一个重要的方 向，它可通过异源表达来研究基因功能，获得目标化合物或对现有的化合物进行 结构改造。生物合成基因簇一般较大，常规的DNA载体由于容量不足、拷贝数 较低或不能在不同的异源宿主间穿梭表达而难以对其进行操作。本研究运用重组 工程策略和常规的分子生物学克隆手段，将多个异源表达所必须的功能基因克隆 至常用的BAC载体pECBACl，获得了一个可在大肠杆菌一链霉菌一假单胞菌 三个常见的异源表达宿主间进行穿梭表达的BAC载体。 链霉菌(唧仞垅弦嚣)属于革兰氏阳性菌中高G+C％类群，具有复杂的发 育和分化生长周期，并具有产生抗生素和生理活性物质的特性，是临床用药的重 要来源。 81是从土壤中分离得到的一株链霉菌，前期生物学活性分析结果证实 sp 该菌能产生多种生物活性物质，但其产生的活性物质难以分离纯化。为了研究其 菌体内活性物质的生物合成基因，我们构建了该菌株的基因组文库用于基因表 达。 kb一40 提取＆Sp81总DNA