低温处理下白玉菇丝氨酸蛋白酶的活性及分子特征.pdfVIP

— ２７０— 江苏农业科学　２０１５年第４３卷第９期 孙新菊．低温处理下白玉菇丝氨酸蛋白酶的活性及分子特征［Ｊ］．江苏农业科学，２０１５，４３（９）：２７０－２７２． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１５．０９．０９０ 低温处理下白玉菇丝氨酸蛋白酶的活性及分子特征 孙新菊 （南京特殊教育师范学院，江苏南京２１００３８） 　　摘要：白玉菇（Ｈｙｐｓｉｚｙｇｕｓｍａｒｍｏｒｅｕｓ）是真姬菇的白色品种，其营养价值丰富，具有独特的蟹香味。为延长白玉菇 的货架期，对其进行低温处理，并研究在贮藏过程中丝氨酸蛋白酶活性及分子特征的变化。研究结果显示，白玉菇在 低温（４℃）处理下可保鲜５ｄ，而在常温（２５～２８℃）下保鲜时间则很短（１～２ｄ）；对白玉菇贮藏过程中丝氨酸蛋白酶 的活性及Ｓｐｒ基因表达的研究表明：低温处理下丝氨酸蛋白酶的活性及基因的表达都明显低于对照。研究结果说明， 白玉菇的货架期与丝氨酸蛋白酶活性密切相关。 　　关键词：白玉菇；低温处理；丝氨酸蛋白酶；Ｓｐｒ基因表达；分子特征 ＋ 　　中图分类号：Ｓ６４６．９０９．３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１５）０９－０２７０－０３ 　　白玉菇味比平菇鲜，肉比滑菇厚，质比香菇韧，口感极佳， 拿到实验室，选择没有机械损伤、疾病以及形状、颜色均匀的 还具有独特的蟹香味。白玉菇的蛋白质中氨基酸种类齐全， 作为试验材料（图１－ａ）。试验材料分为２组，每组 １０个，一 包括８种人体必需氨基酸，其菇体洁白如玉，质地细腻，是一 组放在４℃冰箱，另一组常温放置（２５～２８℃）；分别放置 ［１］ 种低热量、低脂肪的保健食品 。 ５ｄ，每组３次重复。每组的３个重复每天分别取样（菌柄、菌 在食用菌贮藏过程中，会受到温度、水分、采收时期、气体 盖、菌褶）后立即用液氮速冻，－８０℃保存备用。 环境、病原菌感染及有氧呼吸等的影响而出现失重、菌柄生 长、菌伞开张、菌褶发育、菌盖伸展、孢子形成与弹射、纤维素 ［２］ 化、组织呈水浸状、褐变以及品质下降等现象 ，这些症状的 产生与食用菌的生理代谢及其分子机理密切相关。食用菌储 藏过程中，蛋白质的降解会引起细胞结构及生理功能的变化， 还会引起氨基酸含量的升高，正是氨基酸含量及组成的变化 ［３］ 造成了食用菌风味的变化 。丝氨酸蛋白酶是一类以丝氨酸 为活性中心的重要蛋白水解酶，广泛分布于植物中，在生物有 ［４－５］ 机体中起着重要而广泛的生理作用 。目前已经从芫荽、欧 芹、双孢菇等植物中分离到了不同类型的丝氨酸蛋白酶，其活 １．２　试验方法 性随着植物生长发育阶段的不同而变化。Ａｚｅｅｚ等研究发现， １．２．１　丝氨酸蛋白酶活性的测定　白玉菇丝氨酸蛋白酶活 ［６］ 在唐菖蒲的衰老过程中丝氨酸蛋白酶的活性不断提高 ； 性的测定具体步骤参照丝氨酸蛋白酶（ＰＲＳＳ）ＥＬＩＳＡ试剂盒 Ｒｏｂｅｒｔｓ等采用蛋白酶单一抑制剂的检测方法在衰老的大麦叶 说明。 ［７］ 片中和暗诱导衰老的大麦叶片中发现２种丝氨酸蛋白酶 。 １．２．２　基因组ＤＮＡ提取　采用改良的ＣＴＡＢ－氯仿 －异戊 ［１２］ 多种植物的衰老过程都与丝氨酸蛋白酶活性的不断提高相关， 醇法进行白玉菇基因组ＤＮＡ提取 。 如大麦、鸢尾、欧芹、月季、木樨和双孢菇等［４－１１］。 １．２．３　总ＲＮＡ的提取及 ｃＤＮＡ的合成　本试验提取 ＲＮＡ 为延长白玉菇的货架期，本研究对其进行低温处理，并研 所用的离心管、枪头等塑料用品先用０．１％的ＤＥＰＣ