侧枝萌发诱导基因(iLIFi)的原核表达br与农杆菌介导转化麻风树幼叶.pdfVIP

— １４— 江苏农业科学　２０１５年第４３卷第９期 宗　桦，胡　霞，陈学宏．侧枝萌发诱导基因（ＬＩＦ）的原核表达与农杆菌介导转化麻风树幼叶［Ｊ］．江苏农业科学，２０１５，４３（９）：１４－１９． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１５．０９．００４ 侧枝萌发诱导基因（ＬＩＦ）的原核表达 与农杆菌介导转化麻风树幼叶 １ ２ ３ 宗　桦 ，胡　霞 ，陈学宏 （１．西南交通大学建筑学院，四川成都６１００３１；２．乐山师范学院生命科学学院，四川乐山６１４００４； ３．西南交通大学生命科学与工程学院，四川成都６１００３１） 　　摘要：麻风树（ＪａｔｒｏｐｈａｃｕｒｃａｓＬ．）的有限分枝是限制麻风树油产量的最主要因素之一，为了奠定基因调控麻风树 分枝的基础，研究并优化了侧枝萌发诱导基因ＬＩＦ（ｌａｔｅｒａｌｓｈｏｏｔ－ｉｎｄｕｃｉｎｇｆａｃｔｏｒ）的原核表达条件，并成功获得了重组 蛋白。通过研究农杆菌浓度、抗生素浓度建立了稳固高效的麻风树农杆菌（（ＬＢＡ４４０４）高效转化体系；将ＬＩＦ基因转 入麻风树基因组中，通过ＧＵＳ染色、ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测，确定了ＬＩＦ基因已经成功转化入麻风树基因组中，获得了 高达（２３．９１±５．７８）％的转化率。 　　关键词：麻风树；侧枝萌发诱导基因（ＬＩＦ）；幼叶；农杆菌 　　中图分类号：Ｑ９４３．２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１５）０９－００１４－０６ 　　属于大戟科的麻风树（ＪａｔｒｏｐｈａｃｕｒｃａｓＬ．）是一类具有极 ＬＩＦ诱导的蛋白的功能研究还未开展。再加上植物分枝的形 强抗旱性的大灌木或小乔木，其种子中含油丰富，并能较容易 成是一个受多种因素影响的复杂的生物学现象，因此，针对单 ［１］ 地转化成纯度能满足美国和欧洲标准的生物柴油 。此外， 个基因开展蛋白纯化研究对于了解其在植物形态构成上的功 ［２－４］ 麻风树油还可应用于制造肥皂、化妆品、染料等产品 。然 能有一定的难度。而通过重组的方式在大肠杆菌中进行原核 而，由于麻风树的种子产量较低，极大地限制了麻风树油的推 表达为ＬＩＦ基因的功能研究提供了一个良好的途径。众所周 广应用。迄今为止，提高麻风树种子的产量仍是一件十分困 知，大肠杆菌是现代分子生物学研究中最常用的材料之一，目 难的事情，这是由于麻风树的种子产量受到多种因素影响，如 前除了己经掌握了它的分子生物学和分子遗传学方面的大量 ［５］ ［６］ ［７］ 自然环境 、麻风树的分枝形态 、基因型 、经营管理方 资料外，在基因表达方面也有深入研究。大肠杆菌遗传背景 ［８］ 法 等。在这些因素当中，麻风树结果母枝的分枝形态被认 清楚，容易培养，能大规模发酵，并具有大量可供选择利用的 ［１５］ 为是最重要的制约因素之一，因此许多学者认为增加麻风树 克隆和高效表达载体 。 ［８－９］ 结果母枝的数量就能有效地提高麻风树种子的产量 。 本研究构建了ＬＩＦ原核表达载体，转入大肠杆菌 ＢＬ２１ 近年来，世界各国都开始关注植物分枝发育控制机理的 中，将转化子进行诱导表达，获得重组蛋白，摸索表达的最优 研究，通过采用包括突变体分离、定位、克隆相关基因和相关