山葡萄黄烷酮3-羟化酶iVamF3Hi基因及其克隆.pdfVIP

— ３６— 江苏农业科学　２０１５年第４３卷第１０期 李　娟，曹芳芳，权　哲，等．山葡萄黄烷酮３－羟化酶ＶａｍＦ３Ｈ基因及其克隆［Ｊ］．江苏农业科学，２０１５，４３（１０）：３６－４０． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１５．１０．０１０ 山葡萄黄烷酮３－羟化酶 ＶａｍＦ３Ｈ基因及其克隆 李　娟，曹芳芳，权　哲，刘海峰 （延边大学农学院，吉林延吉 １３３０００） 　　摘要：采用ＲＴ－ＰＣＲ与ＲＡＣＥ技术相结合的方法，从山葡萄果皮中克隆到黄烷酮３－羟化酶（Ｆ３Ｈ）基因的ｃＤＮＡ 全长序列。该基因全长１３９８ｂｐ，包含１０９２ｂｐ的完整开放阅读框，编码３６３个氨基酸，相对分子质量为４０．８１ｋｕ，等 电点（ＰＩ）值为５．３７。二级结构预测表明，随机卷曲是ＶａｍＦ３Ｈ蛋白最大量的结构元件，不具有信号肽，属于不稳定亲 水蛋白。氨基酸序列与欧亚种葡萄（ＦＱ３８９９５０）、圆叶葡萄（ＫＦ０４０９７０）、美国蔓藤（ＪＸ０８７４４１）等的Ｆ３Ｈ类基因同源性 较高，相似性分别为９９％、９９％、９６％。 　　关键词：山葡萄；ｃＤＮＡ克隆；黄烷酮３－羟化酶 　　中图分类号：Ｓ６６３．１０１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１５）１０－００３６－０５ ［４］ 　　黄烷酮３－羟化酶（ｆｌａｖａｎｏｎｅ３－ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，Ｆ３Ｈ）是花 切 ，然而此方面的研究尚较少。Ｈｏｌｔｏｎ等发现Ｆ３Ｈ对黄烷 色素合成途径中的结构基因，是花青素生物合成途径中的关 酮、儿茶酸、原花青素、花青素代谢影响较大，是该代谢途径的 ［１］ ［３］ 键酶 。Ｆ３Ｈ属于依赖２－酮戊二酸的双加氧酶，反应需要 关键酶 。Ｌｅｐｉｎｉｅｃ等研究证实，由Ｆ３Ｈ和Ｆ３′Ｈ催化生成的 ［２］ ［５］ ２－酮戊二酸、分子氧、铁、抗坏血酸 。其作用为催化柚皮 黄烷酮醇在 ＤＦＲ的催化作用下能够合成无色花青素 。 素Ｃ３位羟基化，生成二氢山奈酚（ｄｉｈｙｄｒｏｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ，ＤＨＫ）， ［６］ Ｆ３Ｈ的活性最初在紫罗兰花中被检测到 。Ｍａｒｔｉｎ等利用鉴 而ＤＨＫ是黄酮和异黄酮合成的重要中间产物；因此，Ｆ３Ｈ调 别筛选与基因图谱技术首次从金鱼草中分离克隆到Ｆ３Ｈ基 控着黄酮与花青素苷产物的合成，是整个黄酮类化合物代谢 ［７］ 因 。研究表明，Ｆ３Ｈ基因在矮牵牛等植物中是独立表达 ［３］ 途径的中枢位点 。有报道指出Ｆ３Ｈ与花青苷合成关系密 的，而大多数情况下，Ｆ３Ｈ与其上游的ＣＨＳ、ＣＨＩ基因，以及下 ［８］ 游的ＤＦＲ基因协同表达 。在大多数物种中，Ｆ３Ｈ基因仅以 收稿日期：２０１５－０４－２９ 单拷贝形式存在