川中黑山羊iBMP2、BMP4i基因cDNA克隆及生物信息学分析.pdfVIP

江苏农业科学　２０１４年第４２卷第３期 — １９— 龙石太，胡　亮，吴宪红，等．川中黑山羊ＢＭＰ２、ＢＭＰ４基因ｃＤＮＡ克隆及生物信息学分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１４，４２（３）：１９－２３． 川中黑山羊ＢＭＰ２、ＢＭＰ４基因ｃＤＮＡ克隆 及生物信息学分析 龙石太，胡　亮，吴宪红，字向东 （动物遗传育种学国家民委－教育部共建重点实验室／西南民族大学，四川成都６１００４１） 　　摘要：参照ＧｅｎＢａｎｋ已公布的绵羊ＢＭＰ２基因序列与牛ＢＭＰ４基因序列分别设计一对引物，以川中黑山羊卵巢总 ＲＮＡ为模板，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增川中黑山羊ＢＭＰ２基因和ＢＭＰ４基因的ｃＤＮＡ序列并进行克隆、测序及相关生 物信息学分析。结果表明，川中黑山羊ＢＭＰ２基因编码区全长为１１８８ｂｐ（ＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＫＦ４９２９８２），ＢＭＰ４基因 编码区全长为１２３０ｂｐ（ＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＫＦ４９２９８３），分别编码３９５、４０９个氨基酸。川中黑山羊与绵羊、牛、猪、人、 马、鼠、鸡ＢＭＰ２基因编码区序列的同源性分别为９９．７％、９８．７％、９２．０％、８９．６％、９１．４％、８６．１％、７８．９％；川中黑山 羊与绵羊、牛、猪、人、马、鼠、鸡 ＢＭＰ４基因编码区序列的同源性分别为９９．３％、９９．１％、９５．９％、９５．２％、９４．４％、 ９２０％、８０．１％。用ＭＥＧＡ４．０构建物种间分子系统进化树，结果显示，ＢＭＰ２基因和ＢＭＰ４基因的聚类反应基本一 致，川中黑山羊首先与绵羊聚类，再分别与牛、猪、马、人和鼠聚类，最后与鸡聚类，这与动物分类学基本吻合。 　　关键词：川中黑山羊；ＢＭＰ２基因；ＢＭＰ４基因；克隆；生物信息学 　　中图分类号：Ｓ８２７．２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１４）０３－００１９－０４ 　　骨形态发生蛋白（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＢＭＰｓ）是 多胎山羊品种，它具有性成熟早（母羊初情期为３～４月龄， 转化生长因子 （ＴＧＦ－ ）超家族中最大的亚族，是 Ｕｒｉｓｔ等 初配年龄为５～６月龄）、产仔率高（平均产羔率为２７０％）、生 β β 于１９６５年从脱钙骨基质中分离得到的一种有活性的蛋白质， 长速度快、产肉性能好、耐粗食、抗病力强、适应性良好等优 ［１］ 并利用该蛋白质成功诱导了异位成骨 ，所以命名为骨形态 点。为进一步阐明川中黑山羊多胎的分子生物学基础，本研 发生蛋白。许多研究表明，ＢＭＰｓ不仅能诱导骨及软骨的形 究克隆了川中黑山羊 ＢＭＰ２、ＢＭＰ４基因完整编码区，与 成、分化，而且能影响脊椎动物的神经细胞、造血组织、眼睛、 ＧｅｎＢａｎｋ已公布的其他物种进行序列比对，并在此基础上构 肾和上皮附属器官的形成、器官发生以及组织定型与重塑 建物种间分子系统进化树。到目前为止，有关山羊ＢＭＰ２与 ［２］ 等 。ＢＭＰｓ在动物大部分组织中均有表达，在机体的许多 ＢＭＰ４在生物信息学方面的研究尚未见报道，所以本研究采 生命活动中发挥作用，所以关于ＢＭＰｓ的研究越来越受到重 用生物信息学方法分析这２个基因及其氨基酸序列的理化性 视。有研究发现，ＢＭＰｓ与雌性动物的繁殖机能相关，通过旁 质、结构特征等，旨在为进一步开展川中黑山羊ＢＭＰ２、ＢＭＰ４ 分泌／自分泌调节作用对卵巢进行调节，从而调节卵泡发 基因的结构功能、遗传变异、表达调控以及繁殖性状的相关分 ［３－４］ 育 。也有研究表明，ＢＭＰ４可以促进小鼠原始卵泡的形 析等研究提供基础资料。 ［５］ 成及原始卵泡发育为初级卵泡 。ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６和 １　材料与方法 ＢＭＰ７蛋白可抑制绵羊颗粒细胞分泌孕酮，但不会影响