7.人乳头瘤病毒核酸分型检测-透景.docVIP

Shanghai Fenglin Clinical Laboratory Co.,Ltd. 上海枫林检验有限公司 SOP File Code 文件编号： FL-SOP-CL-6007 TITLE: Standard operation procedure for detection of nucleic acid of human papillomavirus with PCR-flow fluorescence assay 文件名称：人乳头瘤病毒核酸分型检测标准操作规程 WRITTEN BY/ DATE 编写者： 罗孝伟 日 期 ： 2012-07-20 REVIEW BY/ DATE 审阅者： 日 期 ： 201APPROVED BY/ DATE 批准者： 日 期 ： REVISION DATE 修订日期： 2011-12-31 New Format/Revision Number 新版/修号： /0 REPLACE NUMBER 被替代版号: EFFECTIVE DATE: 生效日期： Intended Use目的 通过病毒核酸扩增定性检测人体中人乳头瘤病毒分型。 Sphere of Application适用范围 人乳头瘤病毒分型定性检测。 Principle of Test检验方法及原理 Specimen Collection使用的样本 样本种类：阴道或尿道分泌物。 收集方法：宫颈棉拭子将宫颈口擦宫颈宫颈口宫颈宫颈。 病人准备要求： 样本容器的要求：专用样本保存液的容器。 μl，应保证有足够的量用于检测。 拒收样本的规定：除阴道或尿道分泌物以外的样本，应予以拒收。 样本的处理方法：高速冷冻离心机13000转/min离心min备用。 样本的储存规定： 室温 冷藏 （2-8℃） 冷冻 （-20℃） 冷冻 （-70℃以下） 复融 新鲜样本 12小时 7天 3个月 长期保存 1次 样本的运输 采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输，在途时限不宜超过48小时 样本储存 应在检测完成7天内储存，不得超过7天 样本的外送规定： 仪器故障不能立即维修及试剂断货导致不能在报告周期内准时发出检测报告时，样本可外送至其他有医疗资质的单位进行检测。 样本结果可疑或与临床不符时，样本可外送至其他有医疗资质的单位进行复查比对。Reagents，calibrators，quality control试剂、标准品、质控品 试剂、标准品、质控品的产品名 试剂：科技有限公司人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒。标准品： 质控品：科技有限公司。 试剂、标准品、质控品的组成及包装规格试剂 组成成分数量 规格 核酸扩增组份 引物混合液 2管 150uL PCR预混液 2管 300(L 聚合酶 1管 48uL 质控品 1管 L 杂交组份 微球杂交液 1瓶 1.2mL SA-PE 1管 4mL 标准品： 质控品：μl×1支。 试剂、标准品、质控品稳定性与贮存 试剂 杂交组份于2-8℃避光、防冻保存；核酸提取组份于室温或2-8℃保存；核酸扩增组份于-20℃以下冷冻存放；试剂盒有效期为6个月。 N/A 冻存试剂室温融化并振荡混匀后，2000rpm离心10秒钟 标准品 N/A N/A N/A 质控品 N/A 室温放置至少15分钟使其充分复融，颠倒或旋涡振荡混匀后使用。 Instrument仪器 美国ABI7500 实时荧光定量PCR仪；新加坡ESCO Airstream A2型二级生物安全柜；上海培清科技有限公司JS-400A电热恒温金属浴；Thermo CL31R低温高速离心机。 Procedure操作步骤 扩增试剂准备（PCR前准备区） 按下表加入PCR试剂和样品： 试 剂 用 量（单人份） 引物混合液 5μl PCR预混液 10μl Taq 0.8μl 模板DNA 5μl 计算好各试剂的使用量，加入适当体积离心管中，充分混合均匀，2000rpm离心10秒，向设定的n个PCR 反应管中分别加入15μl，转移至样本处理区。 样本处理（样本处理区） 轻微振荡悬浮起保存液中的脱落细胞，确保细胞均匀悬浮起来。 取50μL保存液体于1.5 ml 离心管中，如果有颗粒状物体（疣体）确保有一部分取入离心管。 1000rpm 3分钟， 小心取上清并丢弃。 加入200μl标本提取液，振荡混匀，将离心管放入100oC金属浴10min。 1000 rpm离心5分钟。保留上清以备检测。 加样 向所设定的n个PCR反应管中分别加入步骤中处理过的样本5μl，盖紧管盖，将PCR反应管转移至传递窗，记录样本摆放顺序。 PCR扩增（检测区） PCR仪器循环条件设置： 95℃ 3min95℃ 30s 58℃ 30s