hgf与tgfβ在肾病患儿肾组织中的表达及分析.pdf

HGF与TGF-β在肾病患儿肾组织中的表达及分析 Expression and analysis of HGF and TGF-β in renal tissues of children with nephropathy 关键词：肝细胞生长因子，转化生长因子β，儿童，肾小球硬化， 肾纤维化 学科专业：儿科学（肾脏内科） 研究方向：肾纤维化的早期干预 申请学位：硕士 作者姓名：于冀洋 指导教师：朱光华 教授 培养单位：上海交通大学附属儿童医院 答辩日期:2007 年5 月 目 录 中 文 摘 要1 英 文 摘 要4 前 言7 实 验 对 象9 实 验 方 法10 实 验 结 果11 结 果 讨 论19 展 望25 参 考 文 献26 致 谢29 研究生期间完成论文30 HGF 与 TGF-β在肾病患儿肾组织中的表达及分析 中 文 摘 要 局灶节段性肾小球硬化（FSGS）是导致儿童及成人肾脏疾病持续进展至终末 [1] 期肾衰最常见的原发性肾小球肾炎的病理类型之一 。临床表现多样，其肾脏病 理表现会随疾病的进展出现全小球硬化，肾小管的萎缩和间质纤维化也逐渐增多 呈弥漫性分布。如何阻断或延缓局灶节段性肾小球硬化疾病的进展特别是目前临 床和基础研究的一个热点。 目前研究发现肾组织中有多种细胞因子与 FSGS 发生有关，依作用不同将加 速FSGS发展的物质称为正向调控因子，代表物质如转化生长因子β（TGF-β）， 结缔组织生长因子（CTGF）等；将抑制 FSGS 发展的物质称为负向调控因子如肝 细胞生长因子（HGF）,骨形态发生蛋白（BMP)等。肝细胞生长因子和转化生长因 子β是两种主要影响FSGS肾病发展的细胞因子，并且两者存在一定负向相关性。 本实验以儿童肾组织为研究对象，通过免疫组化的方法，分析肝细胞生长因 子和转化生长因子-β在FSGS肾病儿童肾组织当中的表达及两者的相互关系 研究目的 （1）肝细胞生长因子和转化生长因子β在薄基底膜肾病患儿肾组织中的表达。 （2） 肝细胞生长因子和转化生长因子β在局灶节段性肾小球硬化肾病（肾间质 未见病变和肾间质轻度纤维化）患儿的肾组织不同区域的表达。 （3） 肝细胞生长因子和转化生长因子β与肾组织病变程度的关系。 （4） 在FSGS肾病的儿童肾组织中肝细胞生长因子和转化生长因子β的关系。 研究方法 （1） 实验组的选择 选择临床诊断为原发性肾病综合征同时肾组织病理诊断为局灶节段性肾小 球硬化的患儿 35 例。（光镜下病变不明显者 22 例为实验组 1，光镜下病变明显 者13例为实验组2） （2） 对照组的选择 选择符合临床诊断为孤立性血尿同时肾组织病理诊断为薄基底膜肾病（免疫 1 荧光均阴性）的患儿26例 （3） 儿童肾脏中细胞因子表达：采用免疫组化－SP法检测 滴加兔抗人肝细胞生长因子多克隆抗体（美国HLA公司 1：150）或兔抗人 转化生长因子β多克隆抗体（美国HLA公司 1：200）。 （4） 肾组织中的转化生长因子β和肝细胞生长因子表达的半定量分析 S1:应用显微镜观察细胞（×400）行单盲读片，以胞浆出现棕黄色染色为阳性信 号，肾小球系膜区域随机选取10个高倍镜视野，肾小管间质区域随机选取10个高 倍镜视野。 S2:采用IMS医学图像分析软件，测定所选切片中的HGF和TGF-β的阳性面积占每 个分析视野总面积的比值和阳性强度值。 S3:两种因子的表达水平用免疫组化指数表示，免疫组化指数=阳性面积比×强度 值。 （5）统计学处理： 测定结果用SPSS软件进行统计学处理,数据用x ±s 表示。组间均数的比较采 用t检验（P0.05有统计学意义