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bFGF／EaF对大鼠胚胎神经干细胞增殖的影响 硕士研究生： 蔡明 指导教师： 吕德成 教授 指导小组： 张卫国 教授 专业名称： 外科学 摘 要 目的： 、 神经细胞被认为是一种终末细胞，哺乳动物和人中枢神经系统的 神经元在出生后不久就丧失再生能力，因此中枢神经系统损伤后的恢 复相当困难。随着干细胞研究的进展，这一认识面临重大挑战。近年来 已经相继从啮齿类动物和人的胚胎及成年脑组织中发现、分离和纯化 stem 出神经干细胞(neuralcell，NSC)。神经干细胞是具有多分化潜 能和自我更新能力的原始祖细胞。从胚胎脑组织分离、纯化的神经干 细胞不仅能促进神经元的再生、脑组织的修复，而且通过基因操作，用 神经干细胞可作为载体用于某些神经系统疾病的基因治疗。但是，神 经干细胞的很多方面如神经干细胞如何最优化培养，如何合理诱导分 化等诸多难题仍然有待解决。本试验旨在探索不同条件对大鼠胚胎神 经干细胞增殖的影响，以找到培养大鼠胚胎神经干细胞的最佳方法和 条件。 方法： 将孕14天的SD大鼠引颈处死后，无菌条件下取出胎鼠的纹状体， 剪碎后以机械吹打法制成单细胞悬液，用无血清培养法在基础培养基 为DMEM／F12的培养液中进行培养，培养基中加入表皮生长因子 (印iderrnal留owth fibroblastNctor’bFGF)生长因子，观察不同阶段的神经干细 growth 胞生长情况。用胎牛血清促进分化，观察不同阶段细胞形态并用免疫 荧光技术鉴定神经干细胞。在不同浓度的EGF，bFGF中观察细胞的增殖 生长情况，以寻找最适宜大鼠胚胎神经干细胞增殖的生长因子及其工 作浓度。 结果： 利用胚胎大鼠纹状体成功完成了原代培养大鼠胚胎神经干细胞。 原代培养的胚胎大鼠神经干细胞呈悬浮生长状态。一周就可形成较大 的细胞团。力N10％胎牛血清后第四天，镜下实验组细胞团周边可见细长 的放射状的突起，神经干细胞大部分贴壁，细胞之间相互交叉，出现 突起，有的可交织成网状，而对照组未见明显变化。 其中，当bFGF的浓度在0～10 ng·mL。1时，培养液中的细胞呈逐渐增多 增大的趋势；在10～20 ng·mL一基本呈平稳状态，略有增加，并维持在 较高水平，然后逐渐下降。当EGF的浓度在O~20 ng·mL。时，神经干 细胞呈逐渐增多增大的趋势；在20～30 ng·mL一无明显变化，并维持在 较高水平，然后逐渐下降。当EGF+bFGF的浓度在O～20 ng·mL。1时， 细胞呈逐渐增多增大的趋势；在20～30 ng·mL。无明显变化，并维持在 较高水平，然后逐渐下降。bFGF在10～20ng／mL～、EGF在20-30ng／mL 小。 结论： 胚胎大鼠纹状体可用于原代培养胚胎神经干细胞。表皮生长因子 growth (epidermal fibroblast growth 二者有协同作用。 关键词：胚胎大鼠神经干细胞细胞培养细胞增殖 ofneuralstem on EGF EffectofbFGFand multiplication fromrat cells