braf v60e对人胰腺癌细胞株panc-1生物学行为的影响.pdf

中文摘要 BRAF 东南大学附属中大医院普外科 研究生汤永辉导师高乃荣 中 文 摘 要 目的通过构建BRAFV600E真核细胞表达载体并转染人胰腺癌细胞系 Panc．1，探讨BRAF 究胰腺癌的发病机制与治疗提供理论依据。 V600E的阳性细胞克隆， 因)转染人胰腺癌细胞系Panc．1，通过G418筛选出BRAF 并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)23E免疫印迹(WesternbloO的方法加以验证，同 mM谷胺酰氨以及青霉素、链霉素使其浓度 的DMEM培养液中，并向其中加A．2 和72h取出细胞，每孔加10j．tL h 长570nm时的光密度(OD)值，比较三组细胞的生长情况。流式细胞计量术分析： 上室，用棉签拭去残留在滤膜上室表面的残留细胞，经PBS清洗后用4％多聚甲醛 固定，蒸馏水洗涤，髓染色，显微镜(200×)下计数迁移到滤膜下室表面的细胞。 Ⅱ 中文摘要 3T3成纤维细胞条件培养液；然后将上室 Transwell：j、室的下室加．A600pL含NIH 数迁移到滤膜下室表面的细胞。软琼脂克隆形成试验：每组约2，000细胞于60mm 克隆形成率。 Panc．1细胞的A570值明显增大。 (1．90士0．24)％，细胞凋亡率明显降低(尸0．01)。 显增强佃0．oi)。 结论通过将BRAF V600E 凋亡受抑制，而增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力增加；提示BRAF 与胰腺癌细胞的恶性行为密切相关，但其作用机制有待进一步研究。 III 中文摘要 关键词： 胰腺癌；BRAF Matrigel胶 IV 英文摘要 TheEffectofBRAFV600Eon of Biological HumanPancreaticCancerCellLinePallc．1 Graduate：TANG Yong·-huiSupervisor：GAONai-·rong ofGeneral College， Departmant Surgery,Zhong-DaHospital，Medical Southeast 10009，China University,Nanjing，2 ABSTRACT theeffectofBRAFV600Eonthe behaviors Objective：Toinvestigate biological ofhuman cancercelllinePa