srb方法定量测体外诱导的hacat细胞凋亡及人参皂甙对凋亡的影响.pdfVIP

独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：划塾 签字B期：』生年』月立日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、 使用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部；1或机 构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授 权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。 论文作者签名 指导教师签名 签字日期： 一6年6月占譬 SRB方法定量检测体外诱导的HaCaT细胞凋亡 及人参皂甙对凋亡的影响 研究生姓名：刘影 指导教师：涂彩霞教授 专业名称：皮肤病与性病学 摘 要 最近的研究表明角质形成细胞的凋亡在湿疹性皮炎慢性化中起着 关键的作用。角质形成细胞的凋亡导致细胞间连接的破坏，真皮内水 分渗入表皮内，在表皮内形成海绵样病变，这可以使皮肤的屏障功能 受到损害，从而加重湿疹性皮炎。因此，角质形成细胞的凋亡为湿疹 性皮炎慢性化的转折点，阻断角质形成细胞的凋亡可以减轻湿疹慢性 化进程的发生，从而为湿疹性皮炎的治疗提供了一条新的途径，成为 药物筛选的一个新靶点。流式细胞仪可以定量检测细胞的凋亡，此方 法虽然敏感准确，但是需要一定量的细胞和大量的试剂，并且操作复 B(SRB) 杂、耗时，不适合用于高通量的药物筛选。Sulphorhod啪ine 孔板检测方法，如果能区分出细胞的增殖抑制是由凋亡而不是坏死引 起的，就可用此方法初步筛选抑制细胞凋亡的药物。本实验中用干扰 素．Y(IFN．Y)和抗Fas单克隆抗体(amiFasAb)共同作用诱导角质 形成细胞HacaT凋亡，部分模拟湿疹性皮炎的发病机制，以用于筛选 治疗湿疹性皮炎的药物。通过比较SRB和MTT两种检测方法选用更敏 感、准确的SRB方法以及用流式细胞仪同步监测SRB检测结果，建立 了用sRB初步筛选抗细胞凋亡药物的方法，从而为筛选湿疹性皮炎的 治疗药物奠定了实验基础。 方法：IFN．Y和antiFasAb单独或联合作用于体外培养的角质形成 细胞株HaCaT，流式细胞仪检测细胞表面Fas抗原的表达和细胞的凋亡 SRB和MTT方法在线性、日内变异及日间变异上的差异，选用更精确 的方法检测HaCaT细胞的增殖情况。流式细胞仪同步检测SRB方法的 检测结果，以确定用sRB方法筛选抑制角质形成细胞HacaT凋亡的人 参皂甙。 结果：(1)流式细胞仪检测结果显示lFN—Y浓度分别为0ng，m1、 Ab共同作 细胞仪检测结果显示50ng／ml的IFN吖和25n∥ml的antiFas Ab共同作用引起的 抑制剂z．vAD．FMK可有效抑制IFN-v和antiFas MTT方法在日内变异上无显著性差异，而在日间变异上sRB方法小于 MTT方法，两种方法间有显著性差异。(4)流式细胞仪与SRB方法