人工辅助脱水在璃化冷冻小鼠囊胚中的应用.pdfVIP

独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取褥懿磷究成暴。据我爨絮，滁了文中转剩热瑷标逮秘鼗谢熬遗 方外，论文中不包禽其他人已经发焱或撰写过的研究成聚，也不包含 为获褥大连藩秘大学或獒链教育撬构瓣学蕴或诞书两馒髑过的材料。 ％我一同工作的同志对本研究所擞晌任俺贡献均已在论文中作了疆 确的说明并袭示谢意。 学镱论文作者签名：．益拖 签字西鬻：碰年』强上蠢 学位论文版权使用授权书 本学位论文佟者及藜譬教婚完全了瓣大连箧辩大学一§拣爨嫠、 使掰学位论文的飙定，融惫大连暇科大学保黧并向国家有关部门或枫 构遴交学位论文的复印件和电子敝，允许论文被查阕和借测。本人授 投大连篷辩大学霹强涛本学搜论文熬全露或酃分内容缡入有关鼗据 库进行检索，可以采用澎印、缩印藏扫描等麓制手段保存、汇编学位 给文。 戮鬻磊耖 指导教簿麓冬／—筠眨丛驴 签字日期：鲤丛年』月互嗣 人工辅助脱水在玻璃化冷冻小鼠囊胚中的应用 硕士研究生：武艳 指导教师： 邵小光 教授 专业名称： 妇产科学 摘 要 背景：自从1983年报道一例4细胞一8细胞胚胎冷冻移植妊娠以来， 程序化冷冻已普遍应用。但程序化冷冻耗时较长，浪费人力。玻璃化 冷冻技术是指高浓度冷冻保护剂溶液在快速冻结过程中由液态直接变 为极其黏稠的非结构的玻璃态，它有效避免了胚胎内及冷冻液的冰晶 形成。人们尝试各种方法来提高玻璃化冷冻的存活率和孵出率，包括 电子显微镜铜网、冷冻环、开放式拉长麦管。它们主要是通过降低冷 冻液的使用量，提高冷冻速度来实现的。玻璃微针刺破透明带人工皱 缩是近两年研究的方法，它提高存活率的同时也给胚胎造成了一定的 损伤。有报道用直径稍小于囊胚的吸管对扩张期囊胚反复吹打可以使 囊胚腔内的水脱出。用此方法进行人工辅助脱水提高了扩张期囊胚的 存活率和孵出率。这种方法对扩张期囊胚是实用和有效的，但还没有 广泛应用到临床。 目的：研究玻璃化冷冻小鼠囊胚及人工辅助脱水在玻璃化冷冻中 应用后，胚胎存活及继续发育的能力，寻找玻璃化冷冻的具体方法， 探讨玻璃化冷冻方法的机制。为玻璃化冷冻技术应用于临床提供理论 依据。 方法：超排处理60只昆明小白鼠，出现阴道栓的51只小白鼠取出 输卵管及子宫，采集2—4细胞，放入10P液微滴盘进行培养40—72h， 在实体显微镜下观察，选择形态良好的囊胚进行分组，共获得250枚 囊胚，随机分成3组：对照组、单纯冷冻组、辅助脱水组。对照组： 将2．3个发育良好的囊胚移入平衡液中平衡2分钟，再将囊胚移入玻 璃化冷冻液中快速清洗(25．30秒内完成)，对胚胎不进行冷冻处理， 直接进行解冻处理，后继续培养，观察胚胎孵出的能力。后两组均采 用两步法玻璃化冷冻。单纯冷冻组：憋2．3个发帮良好的囊胚移入平 衡液中平衡2分钟，再将囊胚移入玻璃化冷冻液中快速清洗(25—30秒 内宠成)，迅速借助l黻l注射器，按灏序吸取冷冻液、空气、含殛骀 冷冻液、空气、冷冻液，两端用气体柱封闭，直接投入装有液氮的泡 沫盒子，并转移入液氮罐中低温冷冻保存。辅劲脱水组：将2-3个发 育良好的囊胚移入平衡液中人工辅助脱水直至囊胚腔消失(约lO±4．5 分钟)继续平衡2分钟，以下步骤同单纯冷冻组。三组的解冻方法一 样。分别嬲察解冻后麟脸存活至囊躯孵出。涛凝。 结果：对照组供试胚胎70枚，回收胚胎70枚，继续培养存活60枚， 孵密s6校。单鲢冷冻缢供试胚骆86梭，回收胚胎84校，熊冻瑟存活豹 胚胎28枚，孵出15枚。辅助脱水组供试胚胎94枚，回收胚胎90枚，解 冻后存活的胚胎72莜，孵出4l枚。 (1)存活率的比较：对照组、单纯冷滤组、辅助脱水组办活率分 别是85．7％、33．3％、80％。辅助脱水组和对照组存活率无差舜 (p0．05)，存滔率