第五章核酸资料.pptVIP

Chemical sequencing G系统 脱G A+G系统 脱嘌呤 C系统 脱C T + C系统 脱嘧啶 AACAGCTTCA (2) 双脱氧法 原理：以DNA酶促合成为基础，以被测定的DNA单链为模板，通过特殊设计的“末端终止”技术合成出一系列的长度不同的互补链，然后利用凝胶电泳分离这些长度不同的DNA小片段，以此推测DNA序列。 1. “末端终止法”合成出长度不同的DNA小片段 在DNA聚合酶的作用下，以单链DNA为模板，通过引物将dNTP 聚合成DNA模板的互补链。 “末端终止法”是以DNA生物合成为基础，以待测的DNA链为模板.测定时，首先将模板分为4个反应管，分别加入引物和DNA聚合酶，将32P标记的dNTP(仅标记1种）作为底物加入，并分别加入1种双脱氧核糖核苷三磷酸（ddNTP）。在DNA合成酶的作用下，ddNTP会与dNTP竞争参与互补链的合成。但是一旦ddNTP取代dNTP后，就无法继续参与DNA互补链的延伸，DNA链合成终止。从而得到不同链长，均以ddNTP为末端。 (2) 双脱氧法 2. 聚合反应完成后，拆分成单链。 (2) 双脱氧法 3. 凝胶电泳 各组均经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离，再经过放射自显影来检测末端标记的分子。 4. 读序 比较各个泳道，从测序凝胶的放射自显影片上读出DNA序列。 再转换成其互补链的序列，就是最终的被测DNA序列。 (2) 双脱氧法 H H N 4ddNTP系统中 DNA链均终止 在ddNTP(二脱氧核苷酸) ddATP ddCTP ddTTP ddGTP A C T G CTGACTTCGACAA * 核苷酸 是由三部份構造所組成，每一部份又可有數種選擇；例如五碳糖部分，可能是核糖 (ribose) 或是去氧核糖 (deoxyribose)，此種差別造成了DNA 與 RNA 在性質與構造上的不同。 我們所常見的 ATP 分子，是含有核糖，若核糖改成去氧核糖，則寫成 dATP。上圖只是畫出大略的構造關係，請自行在課本上找出確實的分子構造，要能自己默寫出詳細構造才可以；尤其各種鹼基之間，以氫鍵連結的配對情形，一定要十分清楚。 生命的奧祕，幾乎盡藏於此。 * 兩個 核苷酸之間，前一個 (1) 以 3‘-OH 與次一個 (2) 的 5’-磷酸，進行連結形成磷酸二酯鍵 (phosphodiester bond)。 如此一直接下去，就成為核酸的長鏈。但最後有一個磷酸及一個 -OH 基是不被修飾的，因此核酸的長鏈具有方向性，可以寫成 5’-P → 3’-OH 兩端，就像蛋白質有 N-端及 C-端一樣。 又如同蛋白質的 N-C-C-N-C-C-N-C 骨架，核酸長鏈也有分子脊骨，它是以磷酸-核糖輪流出現的 P-R-P-R-P-R 骨架，同時在核糖分子上一個一個加上各種鹼基，組成種種序列。 * 核酸 長鏈的記錄法，當然不能每次都把整個構造寫出來。方便的筆記法是把核糖變成一直線 (R)，從上到下分別是 1’ → 5’，而 1’ 接有鹼基 (B)，5’ 接有磷酸 (P)；各核苷酸間以斜線表示磷酸二酯鍵。 後來覺得這樣還是很麻煩，就省去直線及斜線，以 p 代替雙磷酯鍵，只留下各個不同的鹼基序列，最後又去掉鹼基間的 p；有時特別標出 5’ 及 3’ 端，以作為提醒，因為核酸的方向性極為重要。 * 四、基因和基因组 基因：是DNA分子包含具有遗传效应的特定核苷酸系列的一个基本单位。 在基因表达调控中操纵子模型的建立，进一步丰富了基因的概念。基因不仅是传递遗传信息的载体，又具有调控基它基因表达活性的功能。 基因组：指一种生物体的全部基因或染色体。 基因组DNA序列按其结构和功能可分为以下几类： 1、基因序列和非基因序列 2、编码序列和非编码序列 3、单一序列和重复序列 基因组学（genomics）是研究生物体基因和基因组的结构的组成，稳定性及功能的一门学科 。 包括：结构基因组学 功能基因组学 1．核酸的两性性质及等电点 与蛋白质相似，核酸分子中既含有酸性基团（磷酸基）也含有碱性基团（氨基），因而核酸也具有两性性质。 由于核酸分子中的磷酸是一个中等强度的酸，而碱性（氨基）是一个弱碱，所以核酸的等电点比较低。如DNA的等电点为4～4.5，RNA的等电点为2～2.5。 RNA的等电点比DNA低的原因，是RNA分子中核糖基2′-