第五章激光生物技术应用资料.ppt

第五章 激光生物技术在农业生物学中的应用 在农业科学中，用弱激光刺激动植物，可改善其生理机能，提高农作物产量，改善家畜、家禽的品质，选育优良新品种。弱激光刺激还可使多种菌类加速生成和繁殖。把某种除草剂喷在植物上，在激光作用下，可以有选择地杀灭某种有害杂草，而作物本身却能正常生长。类似的方法也可用来杀灭害虫。 一.激光基因工程 1.基因转移技术-----激光外源导入基 因技术 常规方法有两种： 1.化学法：简单，成功率低（约十万分之一），会 使细胞中毒，有些细胞不能用此法。 2.显微植入法（机械法）：需熟练的操作技术，且 操作速度慢，不适于转化植物原生质体 细胞。 利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或细胞核中。 3.激光外源导入基因技术： 一种比较理想的基因转移法。利用直径很小、能量很高的激光束在细胞表面引起可逆性的穿孔，使细胞培养基里的DNA进入细胞，称为激光外源导入基因技术。 激光外源导入基因技术的效果比显微注射法提高10倍，成功率比化学法高千倍。 1984年日本理化研究所首先报道了该技术； 1986年和1987年美国、荷兰、德国等国家先后报道了这方面的研究工作； 1988年，我国报道了用激光在蚕卵上打孔植入染色质引起蚕变异的成功实验。 把受精卵浸泡在异源染色质溶液中（浸没），当脉冲微术激光穿过卵膜的瞬间，染色质片断便进入卵内。 激光照射瞬间，控制激光功率及时间（短），仅在蚕卵上打出1~5μm的微孔，此外，光照瞬间，膜的通透性大大提高，这是传统基因转移技术无法达到的。 2. 激光显微切割或基因定位 激光捕获显微切割技术的基本原理是： 将组织切片放在倒置显微镜的载物台上，激光束从切片的上方垂直照射下来，落在要切割的区域。该区的乙烯乙酸乙烯酯膜受激光照射后，瞬间温度升高并与其下方的细胞相粘连；当将膜揭起来时，与之相连的细胞也随之被完好地从切片上切割下来；将带有细胞的膜放入试管内经蛋白酶消化使细胞与膜分开，同时也将细胞裂解，获得待提物质，如DNA、RNA或蛋白质等。 微切割技术的贡献是克服了组织的细胞成分非常繁杂这一重大的缺点； 不足之处是技术难度大。 操作方法： 手工操作法； 激光显微切割法。 （1）手工操作 就是用消毒的细针或刀片搔刮组织切片（厚5~15μm）上的细胞，并将其移至Eppendorf管中。 （2）利用激光进行微切割和细胞采集 其特点是微切割的精度高，可进行单个或几个至数十个细胞的切割，可获得很纯的细胞群体，并适用于各种组织材料；其次效率极高，整个过程仅需2~3min或数sec，但仪器价格昂贵。 3.激光诱变育种 优点：缩短育种年限 。 缺点：但方法复杂，成活率较低。 优点：器官大，营养物质含量高。 缺点：发育延迟，结实率低。 优点：能集中位于不同品种中的优良性状。 缺点：只能利用已有的基因组，并不能产生 新的基因； 杂交进程缓慢，过程繁琐。 优点：提高变异的频率，加速育种进程，大 幅度地改良某些性状。 缺点：难以控制突变方向，无法将多个优良 性状组合。 诱变育种 3.小麦获得许多矮秆，丰产、早熟的后代作物，产量增长10％～15％。 4.一种名叫87-2青椒，一个在250克以上，亩产5000公斤左右，维生素C含量增加20％。 5.苹果平均重量从90克提高到160克，亩产比地面良种对照组高30％以上，丰产年份还达到122％。 6.江西广昌县利用航天育种培植出了特大粒白莲种卫星3号，每粒莲子重2.4克以上，比常规品种可增产60％。 由于激光束具有很强的光照度，因此，经过它照射的种子应该有出乎人意料的结果。 20世纪60年代，科学家利用红宝石激光照射胡萝卜、蚕豆等种子，有效提高其发芽率和出苗率； 20世纪90年代，俄罗斯科学家用激光束照射小麦种子，使用这种小麦种子的小麦抽穗多，穗头饱满结实，平均每亩小麦可以提高产量 60 千克，蛋白