核因子κb在子内膜异位症发病机制中作用的研究.pdf

核因子KB在子宫内膜异位症发病 机制中作用的研究 摘 要 生长、浸润、周期性出血，或引起疼痛、不育及结节包块等。近年来此病的发病率不断上 升，已成为第二位的妇科常见多发病。此病性质良性而行为类似恶性疾病。内异症自1860 年首次发现至今发病机制仍不清楚，造成此病治疗的困难，临床处理十分棘手。因此对内 异症发病机制的深入研究，寻找新的、提高疗效的治疗方法十分必要。目前内异症的发病 机制仍阱内膜细胞随经血逆流种植为主导理论，近年来的研究认为内异症是一种典型的炎 症相关性疾病。腹腔局部微环境炎症反应对异位子宫内膜细胞的种植和增殖起非常重要的 作用。 核因子KB(NF—KB)是细胞内普遍存在的重要转录因子，是多条信号转导途径的交汇 点，广泛参与机体免疫、炎症、应激反应等生理及病理过程。NF．KB可高效诱导多种前炎 因的表达，同时对参与炎症级联及放大效应的多种酶的基因转录也具有重要的调控作用。 NF—KB的过度激活可引起一系列炎症相关性疾病，如哮喘、类风湿性关节炎、肠炎、癌症 等，已经引起人们的高度重视。目前国内外关于NF—rOB在内异症发病机制中作用的研究 甚少。本课题通过体外分离培养内异症忠者的异位、在位及非内异症患者的在位内膜腺上 皮细胞及间质细胞，观察前炎性细胞因子TNF一Ⅱ对各组内膜间质细胞增殖的影响，及其影 及探索内异症新的生物治疗提供理论依据。 第一部分分离纯化及体外培养人异位及在位子宫内膜细胞 目的：建立分离纯化及体外培养内异症患者的异位、在位及非内异症患者的在位子宫 内膜腺上皮细胞及间质细胞的方法。方法：通过酶解、筛网过滤、传代及贴壁纯化等技术， 分离20例内异症患者的异位、在位及20例非内异症患者的在位内膜腺上皮细胞及间质细 胞。结果：内异症及非内异症在位内膜分离培养的成功率明显高于内异症异位内膜 (P0．05)。内异症异位内膜培养成功率低主要与取材有关，标本应尽量取自囊壁新鲜 出血区及血管丰富处的内衬组织。经筛网分离及传代能明显提高间质细胞的纯度。经 筛网分离及贴壁纯化能明显提高腺上皮细胞的纯度。结论：通过酶解、筛网过滤、传代 及贴壁纯化等技术能够获得高纯度的内膜腺上皮细胞及问质细胞。 第二部分NF．tcB在子宫内膜异位症发病机制中作用的研究 目的：前炎性细胞因子TNF—o对体外培养内膜间质细胞的影响；探索NF—KB的激活与内 对体外分离培养内异症异位、在位及非内异症在位内膜间质细胞分别进行干预，采用四甲 基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测TNF．Ⅱ对各组内膜间质细胞增殖的影响，采用酶联免疫 免疫细胞化学检测不同干预下各组内膜间质细胞NF．KB活性的改变。观察NF—KB信号传 及在位内膜间质细胞有明显促增殖作用，且呈剂量依赖关系(PO．05)。而对非内异症在 位内膜间质细胞则无明显促增殖作用(PO，05)；(2)在TNF一Ⅱ作用后内异症异位及在 相同的处理下内异症异位及在位内膜间质细胞培养上清液IL．8的含量明显高于非内异症 在位内膜(PO．05)(3)NF—IfB p65免疫细胞化学结果显示内异症异位及在位内膜问质 细胞胞质和胞核均有表达，以胞质为主。而非内异症在位内膜间质细胞仅少数胞质有表达， 胞核无表达。TNF．旺能显著诱导内异症异位及在位内膜间质细胞NF—KB的活化，这种作用 增殖的作用。结论：TNF一0L可能是通过激活内异症异位及在位内膜间质细胞中NF．rB促进 其IL一8的分泌，进而刺激内异症异位及在位内膜间质细胞的增殖。NF．rB通过介导的炎症 反应和细胞增殖作用参与了内异症的发病机制，选择性的抑制NF．KB的活性有望成为内异 症的一种新的治疗途径。 关键词 子宫内膜异位症，核因子KB，n盯一0t factor-KBin ofendometriosis RoleofNuclear pathogenesis ABSTRACT the and of Endometriosisis a diseasecharacterized